高熱預(yù)處理對PC12細胞氧化應(yīng)激損傷的保護作用及其機制研究.pdf

1、第一部分高熱預(yù)處理對PC12細胞氧化應(yīng)激損傷的保護作用 目的：探討高熱預(yù)處理(HPC)對過氧化氫(H2O2)所致大鼠嗜鉻細胞瘤株(PC12)細胞氧化應(yīng)激損傷的影響。 方法：體外培養(yǎng)PC12細胞，將細胞分組：Control組，常規(guī)培養(yǎng)作為對照；HPC組，將細胞置于42℃，5％CO2的培養(yǎng)箱中1h，恢復(fù)常規(guī)培養(yǎng)；H2O2組，H2O2作用1h誘導(dǎo)細胞損傷；(HPC+H2O2)組，細胞置于培養(yǎng)箱中42℃，1h高熱預(yù)處理后18h，

2、再以H2O2作用1h誘導(dǎo)細胞損傷。MTT法測定細胞活力，乳酸脫氫酶(LDH)法檢測細胞損傷，流式細胞術(shù)分析細胞凋亡。 結(jié)果：與Control組相比，H2O2引起PC12細胞活力下降(MTT值1.28±0.23，0.64±0.18，P＜0.01)，LDH釋放量增多(82±4，340±20，P＜0.01)，凋亡明顯；而預(yù)先行HPC，再給予H2O2作用的細胞與單純H2O2處理的細胞相比，則表現(xiàn)為MTT值升高(0.64±0.18,0.8

3、9±0.10，P＜0.05)，LDH釋放量減少(340±20，290±18，P＜0.05)，且沒有出現(xiàn)明顯凋亡。 結(jié)論：高熱預(yù)處理(HPC)對H2O2所致PC12細胞氧化應(yīng)激損傷產(chǎn)生保護作用。 第二部分熱休克蛋白70表達上調(diào)對PC12細胞氧化應(yīng)激損傷保護作用 目的：從細胞和蛋白水平，探討高熱預(yù)處理(HPC)對PC12細胞氧化應(yīng)激損傷保護作用是否由熱休克蛋白70(HSP70)表達上調(diào)所介導(dǎo)。 方法：體外培養(yǎng)

4、PC12細胞，將細胞分組：Control組，常規(guī)培養(yǎng)作為對照；HPC組，將細胞置于42℃，5％CO2的培養(yǎng)箱中1h，恢復(fù)常規(guī)培養(yǎng)至24h；H2O2組，常規(guī)培養(yǎng)18h后，H2O2作用6h誘導(dǎo)細胞損傷；(HPC+H2O2)組，細胞置于培養(yǎng)箱中42℃，1h高熱預(yù)處理后18h，再以H2O2作用6h誘導(dǎo)細胞損傷。各組細胞不同處理后24h，于倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學(xué)改變攝像并用westernblotting方法分析胞內(nèi)HSP70含量變化。另外，獨

5、立檢測PC12細胞經(jīng)HPC后不同恢復(fù)時間胞內(nèi)HSP70含量變化，觀察HPC后胞內(nèi)HSP70含量變化的時間過程。 結(jié)果：①各組細胞不同處理后24h，與Control組細胞相比，單純H2O2處理6h的PC12細胞數(shù)目明顯減少，形態(tài)不規(guī)則，折光性差，部分細胞呈裂解狀態(tài)。而HPC18h后再行H2O2處理6h的PC12細胞則狀態(tài)明顯改善，與單純H2O2處理細胞相比，不但細胞數(shù)目較多，而且細胞形態(tài)較完整，折光性好。②在鏡下觀察細胞形態(tài)學(xué)改變

6、的同時，相同處理的細胞經(jīng)westernblotting方法分析HSP70表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)(HPC+H2O2)組細胞HSP70表達明顯上調(diào)，而單純H2O2組細胞HSP70表達量很低。③獨立檢測PC12細胞內(nèi)HSP70含量變化的時間過程發(fā)現(xiàn)，HPC后3h-6h，HSP70表達迅速上調(diào)，并維持高水平24h-42h。聯(lián)系第一部分的實驗結(jié)果，細胞在HPC18h后，經(jīng)歷H2O2氧化應(yīng)激損傷后24h，始終伴隨著HSP70的高水平表達。 結(jié)論：高