人面果對H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、神經(jīng)退行性疾病(Degenerative diseases of the central nervous system，ND)是一組以原發(fā)性神經(jīng)元變性為基礎(chǔ)的慢性進(jìn)行性神經(jīng)系統(tǒng)疾病。該類疾病主要包括阿爾茨海默氏病(Alzheimer’s disease，AD)、帕金森病(Parkinson’s disease，PD)等。研究發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致神經(jīng)元變性的因素有很多，但目前認(rèn)為神經(jīng)細(xì)胞凋亡過度是導(dǎo)致神經(jīng)元的退行性病變，甚至是導(dǎo)致個體最終死亡的主要

2、原因。而且大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為氧化應(yīng)激損傷，誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡是神經(jīng)退行性疾病發(fā)生及發(fā)展的始動因素。但至今尚無有效成熟的方法和藥物來防治這類疾病。從天然藥用植物中尋找和篩選有較強(qiáng)抗氧化作用化合物，作為防治此類疾病的潛在藥物是目前ND防治的熱點(diǎn)之一。
　　人面果（Garcinia xanthochymus.）是我國傳統(tǒng)傣藥，生長于海拔100-1000 m的溝谷、丘陵、潮濕的密林中，主要分布在我國云南省，具有驅(qū)蟲、清火退熱、解食物中毒之功效。

3、前期研究表明人面果果實(shí)、葉子含有二苯甲酮衍生物、黃酮、三萜和口山酮類等化合物，其中口山酮類化合物作為活性成分具有較廣泛的生物活性，如抗氧化、消除自由基、抗糖尿病、抗菌、抗細(xì)胞毒素、抗HIV病毒等。本實(shí)驗(yàn)旨在體外氧化應(yīng)激模型基礎(chǔ)上，探討人面果果實(shí)和葉子提取物在細(xì)胞水平的抗氧化活性。并試圖闡明其信號傳導(dǎo)途徑及其分子機(jī)制，為深入研究人面果在神經(jīng)退行性疾病防治方面的可行性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　本研究以H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷，建立穩(wěn)定的

4、損傷模型。利用系統(tǒng)溶劑提取法，得到人面果果實(shí)及葉子部位提取物。采用Folin-Ciocalteu比色法測定各部分提取物總酚含量，總酚含量較高的提取物用于細(xì)胞保護(hù)活性研究。篩選出對H2O2誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷保護(hù)活性效果較好的提取物，并進(jìn)一步研究其對損傷PC12細(xì)胞在抗氧化酶、過氧化物含量、細(xì)胞形態(tài)及相關(guān)蛋白表達(dá)量的影響。
　　研究表明，葉子乙酸乙酯提取物總酚含量最高，達(dá)到32.22±1.05 mg GA/100 mg。用400μ

5、M H2O2誘導(dǎo)作用于PC12細(xì)胞4 h，細(xì)胞存活率將降低至51.2±3.0％；LDH釋放率由正常狀態(tài)下的32.4±2.5%升高到72.7±5.0%。50μg/mL濃度的果實(shí)乙酸乙酯(Fruit-EFr.)部位提取物預(yù)處理，能夠使細(xì)胞存活率提高到90%以上，LDH釋放率降低到接近正常組水平。Hoechst33258染色觀察發(fā)現(xiàn)，H2O2誘導(dǎo)組細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，細(xì)胞內(nèi)染色質(zhì)固縮；同時細(xì)胞內(nèi)ROS和MDA含量升高；CAT、SOD活性及線

6、粒體膜電位均降低。用槲皮素或者Fruit-EFr.預(yù)處理后，顯著性改善H2O2誘導(dǎo)引起的各種細(xì)胞損傷及凋亡，使PC12細(xì)胞各項(xiàng)生化指標(biāo)趨于正常水平。Western Blot檢測結(jié)果顯示，槲皮素或者Fruit-EFr.預(yù)處理，能夠抑制由H2O2誘導(dǎo)引起的Bax的表達(dá)升高、Bcl-2的表達(dá)量降低以及細(xì)胞色素C的釋放。Fruit-EFr.預(yù)處理同時能夠激活A(yù)kt的磷酸化，增加Nrf2和HO-1的表達(dá)。
　　本實(shí)驗(yàn)從細(xì)胞水平研究了人面果果