黃岑苷對(duì)H2O2誘導(dǎo)人牙周膜細(xì)胞損傷后作用的研究.pdf

1、基于氧化應(yīng)激在各種疾病中的影響，近年來(lái)國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者都致力于氧化損傷在全身疾病中作用的研究。牙周疾病是人類口腔疾病中兩大最常見(jiàn)的疾病之一。在我國(guó)，牙周疾病的患病率明顯高于齲病[1]。隨著患者對(duì)牙周疾病治療的需求明顯增加，對(duì)牙周疾病的病因以及損傷機(jī)制的研究報(bào)道也在增加，這對(duì)牙周疾病進(jìn)行針對(duì)性的治療有著重要的臨床指導(dǎo)意義。最近學(xué)者們研究發(fā)現(xiàn)，牙周感染后的氧化應(yīng)激（oxidative stress，OS）必然發(fā)生，而氧化損傷是導(dǎo)致牙周組織損傷

2、的主要因素之一[2]，但是目前針對(duì)牙周組織的氧化損傷及抗氧化作用機(jī)制卻少有研究。據(jù)分析，氧化損傷是代謝性系統(tǒng)性疾病與牙周炎之間的一個(gè)潛在的連接，兩種環(huán)境中氧化損傷產(chǎn)物的血清水平均有升高，這些產(chǎn)物都具有雙向影響性[3，4]。氧化損傷是炎癥反應(yīng)的一個(gè)組成部分，所以在一般炎癥治療時(shí)不能忽視抗氧化治療，需應(yīng)予以重視[5]。黃岑苷作為中藥黃岑的提取物，具有抗炎、抗菌、抗氧化等作用，已成熟用于機(jī)體其他組織的氧化損傷治療。因此，本研究以原代培養(yǎng)的人牙

3、周膜細(xì)胞為基礎(chǔ)，用H2O2誘導(dǎo)人牙周膜細(xì)胞氧化損傷，建立其氧化損傷模型，模擬人牙周膜細(xì)胞氧化損傷環(huán)境，探討中藥提取物黃岑苷在H2O2誘導(dǎo)人牙周膜細(xì)胞損傷后的細(xì)胞抗氧化反應(yīng)和細(xì)胞毒性中的保護(hù)作用。
　　1.目的：
　　1.運(yùn)用H2O2建立人牙周膜細(xì)胞氧化損傷模型。
　　2.探索黃岑苷對(duì)H2O2誘導(dǎo)人牙周膜細(xì)胞氧化損傷后的保護(hù)作用。
　　2.方法：
　　1.原代培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞(human periodonta

4、l ligament cells, hPDLCs)并鑒定。
　　2.CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖及活性，選擇適合的H2O2濃度，建立人牙周膜細(xì)胞氧化損傷模型。
　　3.采用Hoechst33342熒光染色法觀察損傷后細(xì)胞核形態(tài)。
　　4.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組人牙周膜細(xì)胞對(duì)H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性反應(yīng)變化及黃岑苷對(duì)損傷后細(xì)胞的作用。
　　5采用分光光度計(jì)法檢測(cè)各組細(xì)胞及其上清液的LDH、MDA含量，從而闡明黃岑苷對(duì)人牙

5、周膜細(xì)胞氧化損傷后的保護(hù)作用。
　　3.結(jié)果：
　　1.H2O2引起人牙周膜細(xì)胞增殖活性下降，在H2O2濃度為200μmol/L處理細(xì)胞2h，其吸光度值與其他濃度組有差異（P<0.05）。
　　2.在H2O2濃度為200μmol/L處理細(xì)胞2h，其凋亡率與其他濃度組有差異（P<0.05）。
　　3.濃度為200μmol/L的H2O2損傷后的人牙周膜細(xì)胞經(jīng)不同濃度的黃岑苷處理24h，1-10μg/ml的黃岑苷均能有

6、效的降低細(xì)胞的早期、晚期凋亡率，與其他濃度組有顯著差異（P<0.05）。
　　4.濃度為200μmol/L的H2O2損傷后的人牙周膜細(xì)胞經(jīng)不同濃度的黃岑苷處理24h，1μg/ml的黃岑苷能有效的降低細(xì)胞及其上清液中LDH活性、MDA含量和漏出率，與其他濃度組有顯著差異（P<0.05）。
　　4.結(jié)論：
　　200μmol/L的H2O2可導(dǎo)致人牙周膜細(xì)胞凋亡率增高，同時(shí)細(xì)胞的LDH、MDA漏出率上升，造成細(xì)胞氧化損傷，建