二苯乙烯苷對H2O2誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用研究.pdf

1、目的:研究二苯乙烯苷(TSG)對 H2O2誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用,初步探討TSG抗內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制。
　　方法:體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,以不同濃度的H2O2及TSG作用內(nèi)皮細(xì)胞。采用MTT檢測細(xì)胞活力、Hoechst33258染色觀察細(xì)胞形態(tài)、流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率,篩選造模內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的H2O2濃度及最佳 TSG濃度。RT-PCR檢測 PARP、Caspase-3 mRNA的表達(dá)和Western-blottin

2、g檢測Bcl-2、Bax、PARP、Caspase-3蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:與空白對照組比,以100~500μmol/L H2O2作用內(nèi)皮細(xì)胞后,隨著H2O2濃度增加,細(xì)胞增殖率逐漸降低,除100μmol/L H2O2外,差異均有顯著性,P<0.01;Hoechst33258染色后可見300μmol/LH2O2組中有大量凋亡細(xì)胞;流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:空白對照組凋亡率為1.9±0.01％,隨著 H2O2濃度增加,細(xì)胞凋亡率逐漸增加

3、,凋亡率分別為:6.3±0.03%、14.9±0.2%、25.3±0.3%、28.8±0.6%、33.0±1.1%。經(jīng)TSG預(yù)處理后,隨著TSG濃度增加,細(xì)胞增殖率逐漸增加,與H2O2組相比,10、100μmol/L TSG組細(xì)胞活力增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);Hoechst33258染色后可見10、100μmol/L TSG組凋亡數(shù)量明顯減少;流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:TSG組細(xì)胞凋亡率均降低,凋亡率分別為:18.3±2.60%

4、、16.2±1.96%、15.0±2.35%、12.4±1.37%,除1μmol/LTSG外,其余幾組均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05);RT-PCR和Western-blotting結(jié)果顯示:H2O2組Caspase-3、PARP的mRNA和蛋白水平表達(dá)均增加、Bax蛋白的表達(dá)增加,而Bcl-2蛋白表達(dá)降低,且 Bcl-2/Bax的比值降低。經(jīng) TSG預(yù)處理后,Caspase-3、PARP和Bax的表達(dá)均降低,Bcl-2蛋白的表達(dá)增加,且