黃芪甲苷對腎小球系膜細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究黃芪甲苷對H2O2誘導(dǎo)腎小球系膜細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用,并進(jìn)一步探討其分子機(jī)制。
　　方法:
　　1.建立腎小球系膜細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型
　　將培養(yǎng)的人腎小球系膜細(xì)胞(HMC)隨機(jī)分為6組:正常對照組、H2O2(1×105、2×105、3×105、4×105、5×105nmol?L-1)損傷組,H2O2刺激4h,MTT法檢測細(xì)胞活力,測定細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)的活性。
　　2.黃芪甲苷對腎

2、小球系膜細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用
　　將培養(yǎng)的人腎小球系膜細(xì)胞隨機(jī)分組:①正常對照組;②H2O2模型組;③黃芪甲苷干預(yù)組:黃芪甲苷6.25、12.5、25、50、100nmol?L-1預(yù)處理24h;④陽性藥對照組包括:分別加入抗氧化劑Tempol(1×105nmol?L-1)和人參皂苷Rg1(3×104nmol?L-1)預(yù)先處理24h。各細(xì)胞組處理后,采用MTT法觀察細(xì)胞活力;檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)活性、超氧化物岐

3、化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。
　　3.黃芪甲苷對腎小球系膜細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷保護(hù)作用的機(jī)制
　　將培養(yǎng)的人腎小球系膜細(xì)胞隨機(jī)分組:①正常對照組;②H2O2模型組;③黃芪甲苷干預(yù)組:黃芪甲苷12.5、100nmol?L-1預(yù)處理24h;④陽性藥對照組:抗氧化劑Tempol(1×105nmol?L-1)預(yù)先處理24h。各細(xì)胞組處理后,采用Hoechst33258染色檢測細(xì)胞凋亡;DHE熒光染色檢測胞內(nèi)活性氧的產(chǎn)生;流

4、式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期變化情況;Westernblot方法測定細(xì)胞周期蛋白CyclinD1、CyclinA及磷酸化p38、T-p38的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.建立腎小球系膜細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型
　　檢測結(jié)果顯示:1×105、2×105、3×105、4×105、5×105nmol?L-1H2O2均能誘導(dǎo)腎小球系膜細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激損傷,細(xì)胞存活率明顯降低,細(xì)胞活力與H2O2濃度及其作用的時(shí)間呈正相關(guān)下降趨勢;細(xì)胞培養(yǎng)液中

5、乳酸脫氫酶(LDH)活性升高,且隨著H2O2濃度的增加,培養(yǎng)液中LDH活性有升高的趨勢。
　　2.黃芪甲苷對腎小球系膜細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用
　　黃芪甲苷及陽性藥組均能夠減輕H2O2(3×105nmol·L-1)誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與模型組比較,用藥組細(xì)胞存活率及細(xì)胞活力明顯升高,細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)活性下降、超氧化物岐化酶(SOD)活性升高,丙二醛(MDA)含量降低。
　　

6、3.黃芪甲苷對腎小球系膜細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷保護(hù)作用的機(jī)制
　　結(jié)果顯示:100nmol·L-1黃芪甲苷能夠顯著減輕H2O2(3×105nmol·L-1)誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷;抑制細(xì)胞凋亡,降低胞內(nèi)ROS產(chǎn)量;調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白CyclinD1表達(dá)、各細(xì)胞周期的百分比及細(xì)胞正常增值;降低磷酸化P38的表達(dá)等有關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1.H2O2體外誘導(dǎo)腎小球系膜細(xì)胞氧化損傷模型的建立最佳條件:3×105nmol?L