黃芪甲苷對(duì)糖尿病大鼠肝損傷保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　探討黃芪甲苷（astragalosideⅣ，AS-Ⅳ）對(duì)糖尿病大鼠肝臟損傷保護(hù)作用及其可能機(jī)制，為黃芪甲苷治療糖尿病代謝性肝損傷提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　采用一次性腹腔注射（intraperitoneal injection，ip）鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）60 mg/kg制備大鼠DM模型。72 h后，尾靜脈取血測(cè)空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)B

2、G)，F(xiàn)BG≥11.1 mmol/L確定為糖尿病造模成功大鼠。將成模大鼠隨機(jī)分為糖尿病模型組（DM組）；AS-Ⅳ（20、40和80 mg/kg）給藥組和ROG組（1.28 mg/kg），另設(shè)正常對(duì)照組，給予等容量羧甲基纖維素鈉溶液，每組8只，每日給藥一次，連續(xù)治療6周。實(shí)驗(yàn)期間觀察各組大鼠一般狀況（包括毛發(fā)、精神、進(jìn)食飲水情況等）；測(cè)量各組大鼠體重、FBG的變化；末次給藥結(jié)束后取血，采用放射免疫法檢測(cè)空腹血清胰島素（fasting in

3、sulin，F(xiàn)ISN）水平；紫外可見分光光度計(jì)法檢測(cè)大鼠血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（Alanine aminotransferase，ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate aminotransferase，AST)活性、甘油三脂（Triglyceride，TG）、總膽固醇（Total cholesterol，TC）、高密度脂蛋白（High density lipoprotein，HDL）水平、低密度脂蛋白（low densit

4、y lipoprotein，LDL-C）含量；試劑盒檢測(cè)肝臟組織中谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase，GSH-Px)、總超氧化物歧化酶（Total superoxide dismutase，T-SOD)和丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量變化；HE染色觀察肝組織病理形態(tài)學(xué)變化；免疫組化法（immunohistochemistry，IHC）檢測(cè)肝臟組織中胰島素受體底物2(Insulin re

5、ceptor substrate2，IRS-2)的表達(dá)；蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blot，WB)檢測(cè)磷脂酰肌醇-3-激酶(Phosphatidylinositol3-kinase，PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(Phosphorylated protein kinase B，p-AKT)和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(Glucose transporter4，GLUT-4)的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.與正常組相比，模型組大

6、鼠精神倦怠，活動(dòng)減少，“三多一少”癥狀明顯，出現(xiàn)多飲、多食、多尿、體重減輕；與模型組相比，AS-Ⅳ（20、40、80 mg/kg）和ROG（1.28 mg/kg）組大鼠精神狀態(tài)變好，活動(dòng)增加，多飲多食多尿癥狀顯著減輕，體重增加明顯（P<0.05，P<0.01），在處死時(shí)的第6 w有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　2.與模型組相比，AS-Ⅳ（40、80 mg/kg）組大鼠FBG、FISN、HOMA-IR均明顯降低，ISI明顯升高（

7、P<0.01）。
　　3.與正常組相比，模型組大鼠肝臟指數(shù)、血清TG、TC、ALT、AST明顯增加，而體重明顯減輕（P<0.01）；與模型組比較，AS-Ⅳ（40、80 mg/kg）給藥組肝臟指數(shù)、血清 TG、TC、ALT、AST含量顯著降低，體重、HDL明顯升高，對(duì)LDL-C作用無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05)。
　　4.模型組大鼠肝臟組織中 MDA含量均明顯升高、T-SOD與 GSH-Px降低(P＜0.01)，AS-Ⅳ（40、

8、80 mg/kg）組可顯著升高血清T-SOD與GSH-Px活力，降低MDA含量(P＜0.05)。
　　5. HE染色結(jié)果顯示，對(duì)照組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)清晰、排列整齊、未見明顯特異性改變，DM大鼠肝臟病理?yè)p傷明顯，可見肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂、肝細(xì)胞腫脹、變性、局部有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，AS-Ⅳ（40、80 mg/kg）組和ROG（1.28 mg/kg）組能不同程度減輕大鼠肝臟病理改變。
　　6.免疫組化結(jié)果顯示，模型組DM大鼠肝組織中IRS-2

9、蛋白表達(dá)減少（P<0.01)；AS-Ⅳ（40、80 mg/kg）組和ROG（1.28 mg/kg）組可明顯增加IRS-2蛋白的表達(dá)（P<0.05）。Western blot結(jié)果顯示，AS-Ⅳ（40、80 mg/kg）和ROG(1.28 mg/kg）組可明顯上調(diào)PI3K、p-AKT、GLUT-4蛋白表達(dá)（P<0.05，P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　AS-Ⅳ可降低糖尿病大鼠FBG、FISN、TG、TC水平和ALT、AST活性