黃式甲苷對氧化應(yīng)激損傷的PC12細(xì)胞及SH-SY5Y細(xì)胞的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：帕金森病(Parkinson's disease，PD)是一種神經(jīng)退行性疾病，近年來的大量研究表明，氧化應(yīng)激對于神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生發(fā)展起到非常重要的作用。因此，從天然產(chǎn)物中探索或發(fā)現(xiàn)抗氧化作用的化合物并闡明作用機制，對預(yù)防此類疾病的發(fā)生具有重要的現(xiàn)實意義。黃芪甲苷(Astragaloside Ⅳ)具有多種生物學(xué)活性，如抗氧化、清除自由基、抗炎等效應(yīng)，但黃芪甲苷是否能有效抑制氧化應(yīng)激所致的神經(jīng)元損傷，尚未見報道。本研究通過建立PC

2、12細(xì)胞及SH-SY5Y細(xì)胞氧化應(yīng)激體外模型，探討黃芪甲苷對PC12細(xì)胞及SH-SY5Y細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用與機制，為有效防治神經(jīng)退行性疾病提供有益的實驗數(shù)據(jù)。
　　方法：用H2O2作用PC12細(xì)胞及SH-SY5Y細(xì)胞建立氧化應(yīng)激損傷細(xì)胞模型，通過MTT法檢測細(xì)胞活力；Hoechst33258染色鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)核酸形態(tài)變化；流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期變化及胞內(nèi)活性氧的產(chǎn)生情況；Western blot檢測細(xì)胞周期蛋白C

3、yclin D1、Cyclin A、bax/bc1-2、α-突觸核蛋白、磷酸化p38及T-p38、磷酸化JNK、磷酸化ERK及T-ERK的表達(dá)。
　　結(jié)果：成功建立了H2O2致：PC12細(xì)胞及SH-SY5Y細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型；黃芪甲苷能夠顯著提高H2O2損傷的PC12細(xì)胞及SH-SY5Y細(xì)胞的活力，提升因H2O2導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡率的下降，降低H2O2所致的胞內(nèi)ROS升高的狀況。Hoechst33258染色觀察發(fā)現(xiàn)，黃芪甲苷能夠顯著

4、降低凋亡細(xì)胞核熒光強度，胞核逐漸恢復(fù)正常形態(tài)。機制研究表明：黃芪甲苷通過恢復(fù)H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞周期蛋白Cyclin D1表達(dá)下調(diào)的情況，調(diào)控各細(xì)胞周期的百分比，恢復(fù)細(xì)胞的正常增殖；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)黃芪甲苷是通過抑制H2O2對p38的激活來發(fā)揮作用的；黃芪甲苷抑制了H2O2誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞凋亡蛋白bax/bc1-2比值上升、α-突觸核蛋白表達(dá)升高；通過使用進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)黃芪甲苷是通過抑制H2O2對p38的激活來發(fā)揮作用的。