突觸及Cajal間質(zhì)細胞在胃電刺激調(diào)控胃慢波活動中的作用.pdf

1、第一部分突觸在胃起搏調(diào)控胃慢波活動中的作用
　　目的:研究胃竇肌間神經(jīng)叢中突觸素(Synaptophysin,Syn)分布及其mRNA和蛋白的表達,探討突觸素在胃電起搏/刺激(Gastric Electrical Pacing/Stimulation,GEP/GES)機制中的作用。
　　方法:通過手術建立Wistar大鼠胃起搏模型(近遠端胃各縫制一對電極),分為起搏組(GES組,n=10)和對照組(n=6)。應用免疫組化染色

2、觀察GES組和對照組胃竇間神經(jīng)叢中突觸素分布、采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)和Western-blot分別檢測了GES和對照組胃竇肌間神經(jīng)叢中SynmRNA和蛋白的表達量,以恒定表達的β-actin作為內(nèi)參照。分別計算SynmRNA與β-actinmRNA、Syn蛋白與β-actin蛋白表達積分光密度值的比值(syn/β-actin),以反映組織中SynmRNA和蛋白的相對表達量。
　　結(jié)果:(1)與對照組相比,GES組肌

3、間神經(jīng)叢中Syn免疫反應陽性產(chǎn)物分布顯著增多(806.421±342.135vs448.3±261.467,P<0.05;0.019±0.008vs0.010±0.005,P<0.05)。(2)RT-PCR研究顯示GES組SynmRNA表達顯著強于對照組,GES組syn/β-actin比值明顯較對照組增加(0.146±0.028.vs0.082±0.025,P<0.05);(3)Western-blot研究顯示GES組Syn蛋白表達也較

4、對照組明顯增強,兩組間syn/β-actin比值比較有顯著性意義(0.502±0.098.vs0.298±0.018,P<0.05)。
　　結(jié)論:胃起搏后胃肌間神經(jīng)叢內(nèi)突觸素分布增多,突觸素mRNA和蛋白表達量明顯增加,表明胃竇肌間神經(jīng)叢內(nèi)突觸可能在胃起搏中發(fā)揮了重要作用。
　　第二部分胃電刺激對大鼠胃竇Cajal間質(zhì)細胞的影響
　　目的:研究不同時程胃電刺激對大鼠胃竇Cajal間質(zhì)細胞(Interstitial ce

5、llsof Cajal,ICC)數(shù)量和C-kit受體表達的影響,探討ICC在胃電起搏調(diào)控胃慢波活動中的作用。
　　方法:將大鼠分為刺激1組(刺激一天、刺激一次,n=8),刺激2組(每天刺激一次,連續(xù)刺激20天,n=8)和對照組(不給予任何刺激,n=8)。選用適宜的刺激參數(shù)以控制胃慢波,刺激1組和刺激2組分別刺激1天和連續(xù)刺激20天后處死所有大鼠并取胃竇組織,對照組所有大鼠在第20天用同樣方式處置并取胃竇組織,以免疫組化方法結(jié)合圖像

6、分析技術分析C-kit受體免疫反應陽性細胞的變化,用Westernblot方法分析C-kit蛋白的表達,以恒定表達的β-actin作為內(nèi)參照,計算C-kit蛋白與β-actin蛋白表達積分光密度值的比值(C-kit/β-actin),以反映胃竇組織中C-kit蛋白的相對表達量。
　　結(jié)果:刺激2組大鼠胃肌間神經(jīng)叢內(nèi)C-kit免疫反應陽性產(chǎn)物面積和平均光密度值顯著高于對照組(2066.3124±226.70vs1154.24±593

7、.43,P<0.05,0.20±0.05vs0.13±0.05,P<0.05),而刺激1組與對照組無明顯統(tǒng)計學差異(1280.44+442.72vs1154.24±593.43P>0.05,0.15±0.03vs0.13±0.05,P>0.05)。刺激2組大鼠胃竇組織C-kit蛋白表達相對對照組顯著增高(0.50±0.09vs0.29±0.02,P<0.05)。刺激1組大鼠較對照組無明顯差異(0.31±0.04vs0.29±0.02,P