腸神經(jīng)系統(tǒng)在外源性胃電起搏調(diào)控胃肌電慢波活動中的作用.pdf

1、第一部分:膽堿能受體及神經(jīng)在胃起搏調(diào)控胃肌電慢波活動中的作用 目的:觀察不同毒蕈堿類受體拮抗劑對胃慢波以及刺激能量的影響及胃起搏前后胃肌間神經(jīng)叢中ChAT陽性神經(jīng)和ChATmRNA表達的變化，旨在探討胃起搏神經(jīng)機制。 方法:通過手術(shù)建立Wistar大鼠胃起搏模型，分為刺激組(n=8)和對照組(n=8)。應(yīng)用多導(dǎo)胃腸電記錄儀記錄胃慢波，選用適宜的刺激參數(shù)而實施漿膜胃電起搏以控制胃慢波，應(yīng)用頻譜分析方法分析不同毒()堿類受休

2、拮抗劑對胃慢波以及刺激能量的影響；應(yīng)用免疫組化和RT-PCR方法，結(jié)合圖像分析技術(shù)分析胃竇肌間叢內(nèi)膽堿能神經(jīng)的數(shù)量、活性及ChATmRNA表達的變化。 結(jié)果:(1)①阿托品能誘導(dǎo)胃電紊亂。②Pirenzepine不能引起胃電紊亂。③Methoctramine能誘導(dǎo)胃電紊亂。。 第二部分:五-羥色胺受體及其神經(jīng)參與了胃起搏調(diào)控胃肌電慢波活動 目的:觀察不同5-HT受體拮抗劑對胃慢波以及刺激能量的影響及胃起搏前后胃肌

3、間神經(jīng)叢中5-HT陽性神經(jīng)和MAO-A、MAO-BmRNA表達的變化，旨在探討胃起搏神經(jīng)機制。 方法:通過手術(shù)建立Wistar大鼠胃起搏模型，分為刺激組(n=8)和對照組(n=8)。應(yīng)用多導(dǎo)胃腸電記錄儀記錄胃慢波，選用適宜的刺激參數(shù)而實施漿膜胃電起搏以控制胃慢波，應(yīng)用頻譜分析方法分析不同5-HT受體拮抗劑對胃慢波以及刺激能量的影響；應(yīng)用免疫組化和RT-PCR方法，結(jié)合圖像分析技術(shù)分析胃竇肌間叢內(nèi)5-HT能神經(jīng)的數(shù)量、活性及MAO

4、-A、MAO-BmRNA表達的變化。 結(jié)果:(1)①Methysergide對胃慢波無影響。②Tropisetron對胃慢波也無影響。③GR113808(5-HT4受體拮抗劑)能引起胃電紊亂。 結(jié)論：胃電起搏能控制胃肌電慢波，以較小的刺激能量就能糾正5-HT4受體拮抗劑GR113808引起的胃電紊亂，且促進胃肌間神經(jīng)叢5-HT的釋放，表明胃電起搏可能通過5-HT4受體的介導(dǎo)而對胃肌電慢波進行調(diào)控。 第三部分:氮

5、能神經(jīng)在胃起搏調(diào)控胃肌電慢波活動中的作用 目的:觀察NOS抑制劑L-NAME對胃慢波以及刺激能量的影響及胃起搏前后胃肌間神經(jīng)叢中nNOS陽性神經(jīng)和nNOSmRNA表達的變化，旨在探討胃起搏神經(jīng)機制。 方法:通過手術(shù)建立Wistar大鼠胃起搏模型，分為刺激組(n=8)和對照組(n=8)。應(yīng)用多導(dǎo)胃腸電記錄儀記錄胃慢波，選用適宜的刺激參數(shù)而實施漿膜胃電起搏以控制胃慢波，應(yīng)用頻譜分析方法分析L-NAME對胃慢波以及刺激能量的影

6、響；應(yīng)用免疫組化和RT-PCR方法，結(jié)合圖像分析技術(shù)分析胃竇肌間叢內(nèi)氮能神經(jīng)的數(shù)量、活性及nNOSmRNA表達的變化。 結(jié)果:(1)大劑量(50mg/kg，ip)注射時，L-NAME能引起胃電紊亂。(2)免疫組化結(jié)果顯示對照組胃竇各層組織均可見nNOS陽性纖維，陽性胞體在肌間神經(jīng)叢可見。但刺激組胃竇各層組織中nNOS陽性纖維較對照組明顯增多，在肌間叢中易見陽性胞體，且刺激組比對照組深染。對兩組肌間神經(jīng)叢nNOS陽性產(chǎn)物面積和平均

7、光密度值進行比較，均為刺激組明顯高于對照組。(3)RT-PCR研究顯示GES組nNOSmRNA積分光密度比值(RV)明顯升高，與對照組相比，差異有非常顯著性(P＜0.001)。nNOSmRNA與β-actinmRNA的表達量RV分別為：1.18±0.47，0.81±0.39。 結(jié)論：胃起搏能控制大鼠胃慢波，增大刺激能量能糾正L-NAME引起的胃電紊亂，且刺激胃竇肌間叢NO釋放，表明氮能神經(jīng)可能參與胃電起搏對胃肌電慢波活動的調(diào)控作

8、用，其中NO可能作為一種信使分子，調(diào)節(jié)其他神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。 第四部分:胃起搏調(diào)控胃肌電慢波活動中血管活性腸肽能神經(jīng)的作用 目的:觀察VIP受體拮抗劑[D-P-Cl-Phe6,Leu17]-VIP(V4380)對胃慢波以及刺激能量的影響及胃起搏前后胃肌間神經(jīng)叢中VIP陽性神經(jīng)和VIP前體mRNA表達的變化，旨在探討胃起搏神經(jīng)機制。 方法:通過手術(shù)建立Wistar大鼠胃起搏模型，分為刺激組(n=8)和對照組(n=8)

9、。應(yīng)用多導(dǎo)胃腸電記錄儀記錄胃慢波，選用適宜的刺激參數(shù)而實施漿膜胃電起搏以控制胃慢波，應(yīng)用頻譜分析方法分析V4380對胃慢波以及刺激能量的影響；應(yīng)用免疫組化和RT-PCR方法，結(jié)合圖像分析技術(shù)分析胃竇肌間叢內(nèi)VIP能神經(jīng)的數(shù)量、活性及VIP前體mRNA表達的變化。 結(jié)果:(1)給最高濃度(10-5M,ip)時,V4380能引起胃電紊亂。(2)免疫組化結(jié)果顯示對照組VIP陽性纖維在環(huán)肌和粘膜肌中易見，肌間叢易見，粘膜和粘膜下叢也可見

10、，而刺激組VIP陽性纖維僅在環(huán)肌和肌間叢依稀可見，且著色淺淡。對兩組肌間神經(jīng)叢VIP陽性產(chǎn)物面積和平均光密度值進行比較，刺激組顯著低于對照組。(3)RT-PCR研究顯示GES組VIP前體mRNA積分光密度比值(RV)明顯降低，與對照組相比，差異有非常顯著性(P＜0.001)。兩組VIPmRNA與β-actinmRNA的表達量RV分別為：0.31±0.12，0.73±0.28.結(jié)論：胃起搏能控制大鼠胃慢波，以較小刺激能量就能糾正V4380

11、引起的胃電紊亂，且抑制胃竇肌間神經(jīng)叢VIP釋放，表明VIP能神經(jīng)可能參與胃電起搏對胃肌電慢波活動調(diào)控作用。 第五部分:P物質(zhì)能神經(jīng)在胃起搏調(diào)控制胃慢波活動中的作用 目的:觀察胃起搏前后胃竇肌間神經(jīng)叢中SP陽性神經(jīng)和SP前體mRNA表達的變化，旨在探討胃起搏神經(jīng)機制。 方法:通過手術(shù)建立Wistar大鼠胃起搏模型，分為刺激組(n=8)和對照組(n=8)。應(yīng)用多導(dǎo)胃腸電記錄儀記錄胃慢波，選用適宜的刺激參數(shù)實施漿膜胃電

12、起搏以控制胃慢波，應(yīng)用免疫組化和RT-PCR方法，結(jié)合圖像分析技術(shù)分析胃竇肌間叢內(nèi)SP能神經(jīng)的數(shù)量、活性及SP前體mRNA表達的變化。 結(jié)果:(1)免疫組化結(jié)果顯示刺激組SP陽性纖維在環(huán)肌和粘膜肌中易見，肌間叢易見，粘膜下叢也可見。而對照組胃竇各層組織也可見，但分布數(shù)量明顯減少，且著色淺淡。對兩組肌間神經(jīng)叢SP陽性產(chǎn)物面積和平均光密度值進行比較，刺激組明顯高于對照組。(2)RT-PCR研究顯示GES組SP前體mRNA積分光密度比