胃電刺激對ICC表型及ICC-ENS突觸連接可塑性的影響.pdf

1、本研究分為二部分： 第一部分、糖尿病大鼠胃ICC表型及ICC-ENS突觸連接的改變 第一節(jié)、糖尿病大鼠胃ICC表型的改變 目的：以糖尿病胃輕癱大鼠為模型，研究糖尿病不同時期ICC表型的變化，探討糖尿病大鼠ICC 減少的深層原因。 方法：鏈脲佐菌素60mg/kg 腹腔注射制作糖尿病大鼠模型（n=36），分別于造模后第2周、4周、6周、8周、10周、12周處死，每期各6 只，對照組(n=18)給予等量檸檬酸－

2、檸檬酸鈉緩沖液注射，分別與同期糖尿病大鼠一起處死，每期各3 只。電鏡下觀察其胃ICC 超微結(jié)構(gòu)的變化；TUNEL 法檢測細胞凋亡；免疫熒光雙重染色觀察肌間層是否存在ICC 與平滑肌肌絲蛋白α-SMA（平滑肌α-actin)、desmin（平滑肌結(jié)蛋白）或SMHC（平滑肌肌球蛋白重鏈）的雙重表達；RT-PCR和Western Blot 法檢測c-kit、α-SMA、desmin、SMHC和SMLC（平滑肌肌球蛋白輕鏈） mRNA和蛋白表達

3、的變化。 結(jié)論：糖尿病大鼠胃內(nèi)ICC 表型可能在糖尿病病程中早期起向平滑肌表型轉(zhuǎn)化。 第二節(jié)、SCF/KIT信號通路在糖尿病大鼠胃ICC表型改變中的作用 目的：以糖尿病胃輕癱大鼠為模型，研究糖尿病不同時期SCF/KIT信號通路在ICC表型轉(zhuǎn)化中的作用。 方法：鏈脲佐菌素60mg/kg 腹腔注射制作糖尿病大鼠模型（n=36），分別于造模后第2周、4周、6周、8周、10周、12周處死，每期各6 只，對照組(n

4、=18)給予檸檬酸－檸檬酸鈉緩沖液注射，分別與同期糖尿病大鼠一起處死，每期各3 只。ELISA方法檢測血清中游離型SCF（S-SCF）的濃度變化；RT-PCR和Western Blot 法檢測膜結(jié)合型SCF（M-SCF）表達的變化。 結(jié)論：糖尿病胃腸動力障礙大鼠血清中游離型SCF 含量和膜結(jié)合型SCF 表達均隨病程延長而減少，且與c-kit 表達呈正相關(guān)，對維持ICC 表型極為重要。 第三節(jié)、糖尿病大鼠胃 ICC-ENS

5、 突觸連接的變化 目的：以糖尿病胃輕癱大鼠為模型，研究糖尿病不同時期ICC-ENS 突觸連接的變化。 方法：鏈脲佐菌素60mg/kg 腹腔注射制作糖尿病大鼠模型（n=36），分別于造模后第2周、4周、6周、8周、10周、12周處死，每期各6 只，對照組(n=18)給予等量檸檬酸－檸檬酸鈉緩沖液注射，分別與同期糖尿病大鼠一起處死，每期各3 只。電鏡下觀察其胃ICC-ENS 突觸連接的變化；免疫組化法觀察肌間層突觸素表達的變

6、化；RT-PCR和Western Blot 法檢測突觸素mRNA和蛋白表達的變化。 結(jié)論：糖尿病大鼠胃內(nèi)肌間層神經(jīng)變性，突觸囊泡明顯減少，突觸素免疫活性降低，突觸素mRNA和蛋白表達隨糖尿病病程延長而顯著下降。 第二部分、長脈沖胃電刺激對ICC表型及ICC-ENS突觸連接可塑性和SCF/KIT通路的影響 第一節(jié)、長脈沖胃電刺激對糖尿病大鼠胃ICC表型可塑性的影響 目的：觀察長脈沖胃電刺激是否能夠促使糖尿病

7、胃輕癱大鼠ICC表型逆轉(zhuǎn)。 方法：埋置胃漿膜電極后制作糖尿病大鼠模型（n=32），分別給于慢性刺激（自糖尿病病程起連續(xù)刺激4周或刺激6周，每組各8 只）和急性刺激（在糖尿病病程第4周或第6周僅刺激1周，每組各8 只）。免疫熒光雙重染色觀察肌間層c-kit 與desmin（平滑肌結(jié)蛋白）或SMHC（平滑肌肌球蛋白重鏈）的雙重表達的ICC細胞的變化；電鏡下觀察其胃ICC 超微結(jié)構(gòu)的變化；RT-PCR和Western Blot 法檢測

8、c-kit、α-SMA、desmin、SMHC和SMLC mRNA和蛋白表達的變化。 結(jié)論：慢性胃電刺激4周可能促使糖尿病大鼠胃內(nèi)部分ICC 表型逆轉(zhuǎn)。 第二節(jié)、長脈沖胃電刺激對糖尿病大鼠胃ICC-ENS突觸連接可塑性的影響 目的：研究長脈沖胃電刺激對糖尿病大鼠胃ICC-ENS 突觸連接可塑性的影響。 方法：制作胃電刺激糖尿病大鼠模型（n=32），從糖尿病病程第4周和第6周第一天起分別給予急性刺激1周，或

9、者從糖尿病病程第1天起分別給予慢性刺激4周或6周，每組各8 只。透視電鏡觀察胃電刺激后胃肌間層ICC-ENS 突觸連接超微結(jié)構(gòu)的變化；免疫組化法檢測胃電刺激后胃肌間層突觸素表達陽性細胞數(shù)目的變化；RT-PCR和Western Blot 法檢測突觸素表達的變化。 結(jié)論：長脈沖胃電刺激能增加糖尿病大鼠胃ICC-ENS 突觸重塑，早期開始的、慢性的胃電刺激效果更佳。 第三節(jié)、長脈沖胃電刺激對糖尿病大鼠胃SCF/KIT通路的影響

10、 目的：研究長脈沖胃電刺激對SCF的影響，探討SCF/KIT 信號通路在ICC 表型逆轉(zhuǎn)中的作用。 方法：制作胃電刺激糖尿病大鼠模型（n=32），從糖尿病病程第4周和第6周第一天起分別給予急性刺激1周，或者從糖尿病病程第1天起分別給予慢性刺激4周或6周，每組各8 只。ELISA 方法檢測血清中游離型SCF（S-SCF）的濃度變化；RT-PCR和Western Blot 法檢測膜結(jié)合型SCF（M-SCF） 表達的變化。