氧糖剝奪誘導的膠質疤痕離體模型的構建.pdf

1、背景和目的:腦缺血后星形膠質細胞激活成為反應性星形膠質細胞,并進一步形成膠質疤痕,抑制軸突再生,影響神經(jīng)功能恢復。目前尚無模擬腦缺血引起的離體膠質疤痕模型,本實驗目的是建立缺糖缺氧(Oxygen-Glucose Deprivation,OGD)誘導的離體膠質疤痕模型,為更好的研究腦缺血后膠質疤痕的形成機制及為尋找促進神經(jīng)功能恢復的靶點或相關藥物提供便利。
　　 方法:體外培養(yǎng)的大鼠原代星形膠質細胞經(jīng)OGD處理6h,分別在再灌后0

2、h、24h和48h檢測各類星形膠質激活及疤痕形成的指標,包括利用MTT法和5-溴脫氧尿核苷(5-Bromodeoxyuridine,BrdU)標記新生細胞數(shù)量法觀察細胞增殖情況,利用細胞免疫化學或免疫印記的方法考察膠質原纖維酸性蛋白(Glial Fibrillary Acidic Protein,GFAP)的表達和硫酸軟骨素類蛋白聚糖neurocan、phosphacan的表達。并將經(jīng)OGD處理的星形膠質細胞與大鼠胚胎皮層神經(jīng)元共培養(yǎng)2

3、4h,觀察對神經(jīng)元突起生長的影響。
　　 結果:在再灌24h,OGD處理的星形膠質細胞增殖明顯,GFAP表達顯著上調,BrdU標記的新生細胞數(shù)明顯增加,膠質疤痕特異性標記蛋白neurocan表達呈顯著上調,而phosphacan的表達在再灌注后呈先下降后恢復的動態(tài)變化。同時,在共培養(yǎng)模型中,將OGD處理的星形膠質細胞在再灌0h時與神經(jīng)元共培養(yǎng),神經(jīng)元突起長度比對照組明顯增長;在再灌24h時進行共培養(yǎng),兩組間無明顯變化;而在再灌4