黃芪甲苷對氧糖剝奪復(fù)氧后星形膠質(zhì)細(xì)胞上TNF-α與AQP-4表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討黃芪甲苷（astragasolide IV，ASIV）對氧糖剝奪復(fù)氧（oxygen glucose deprivation reperfusion，OGD/R）后星形膠質(zhì)細(xì)胞上腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-alpha，TNF-α）與水通道蛋白-4（aquaporin-4，AQP-4）表達(dá)的影響。
　　方法：選用第二代第一天的星形膠質(zhì)細(xì)胞。將星形膠質(zhì)細(xì)胞以每孔2.5萬的濃度接種到96孔板，分

2、別用0.01、0.1、1、10、100ng·mL-1的TNF-α和0.001、0.01、0.1μmol·mL-1黃芪甲苷進(jìn)行干預(yù)。用CCK-8試劑盒檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞活性的變化。將星形膠質(zhì)細(xì)胞分別用0.5、5、10、30、50ng·mL-1的TNF-α進(jìn)行干預(yù)，用RT-PCR方法檢測AQP-4基因表達(dá)水平的變化。將星形膠質(zhì)細(xì)胞分為sham組、TNF-α干預(yù)組、0.001μmol·mL-1ASIV+TNF-α干預(yù)組、0.01μmol·mL-

3、1ASIV+TNF-α干預(yù)組、0.1μmol·mL-1ASIV+TNF-α干預(yù)組，用RT-PCR方法檢測AQP-4基因表達(dá)水平的變化。將星形膠質(zhì)細(xì)胞放入缺氧培養(yǎng)箱（1％O2、94%N2、5%CO2），分別干預(yù)1、2、3、4h，復(fù)氧24h后用RT-PCR和Western Blot檢測AQP-4和TNF-α的表達(dá)情況。將星形膠質(zhì)細(xì)胞分為control組、OGD/R組、OGD/R+0.001μmol·mL-1ASIV組、OGD/R+0.01μ

4、mol·mL-1ASIV組，用RT-PCR和免疫熒光檢測AQP-4和TNF-α的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：當(dāng)TNF-α的濃度為0~100ng·mL-1時對星形膠質(zhì)細(xì)胞無毒性作用可以用于后續(xù)實(shí)驗；所選濃度的黃芪甲苷均可提高星形膠質(zhì)細(xì)胞活性，無毒性作用，可以用于后續(xù)實(shí)驗；與control組相比，各個TNF-α干預(yù)組的AQP-4基因表達(dá)水平均升高，并且具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），但是10ng·mL-1TNF-α干預(yù)組誘導(dǎo)AQP-4基因表

5、達(dá)的作用最為明顯；0.001、0.01、0.1μmol·mL-1黃芪甲苷+TNF-α三個干預(yù)組的AQP-4基因表達(dá)水平與TNF-α干預(yù)組相比明顯降低（P<0.05），但是仍高于sham組；與control組相比，AQP-4基因在缺氧1h和2h時表達(dá)無顯著變化，在缺氧3h時，表達(dá)達(dá)到高峰（P<0.05），在缺氧4h時，表達(dá)有所減弱但是仍高于control組（P<0.05）；與control組相比，氧糖剝奪1、2、3、4h組的AQP-4蛋白

6、表達(dá)水平均升高（P<0.05），并且氧糖剝奪后AQP-4蛋白表達(dá)水平的高峰出現(xiàn)在氧糖剝奪3h時（P<0.05）；與control組相比，TNF-α基因在缺氧1h時，表達(dá)達(dá)到高峰（P<0.05），在缺氧2h時表達(dá)有所減弱但是仍高于control組（P<0.05）。在缺氧3h和4h時，與control組相比，表達(dá)無明顯變化；與control組相比，氧糖剝奪1、2、3、4h組的TNF-a蛋白表達(dá)水平均升高（P<0.05），并且氧糖剝奪后TNF

7、-a蛋白表達(dá)水平的高峰出現(xiàn)在氧糖剝奪1h時（P<0.05）；OGD3h+0.001μmol·mL-1ASIV組和OGD3h+0.01μmol·mL-1ASIV組的AQP-4基因表達(dá)水平較OGD3h組相比明顯降低（P<0.05），但是前者仍高于control組（P<0.05），后者低于control組（P<0.05）；與control組相比，缺氧3h組的AQP-4蛋白表達(dá)水平明顯升高（P<0.05），與缺氧3h組相比，缺氧3h+0.001

8、μmol/mlASI組的AQP-4蛋白表達(dá)水平明顯降低（P<0.05）；OGD1h+0.001μmol·mL-1ASIV組和OGD1h+0.01μmol·mL-1ASIV組的TNF-α基因表達(dá)水平與OGD1h組相比明顯降低（P<0.05）并且仍高于control組（P<0.05）；與control組相比，缺氧1h組的TNF-α蛋白表達(dá)水平明顯升高（P<0.05），與缺氧1h組相比，缺氧1h+0.001μmol/ml ASIV組的TNF-