晚期酒精性股骨頭壞死骨組織中相關基因的表達.pdf

1、背景與目的:
　　自從1922年Axhausen報道了酒精中毒的病人容易患骨壞死疾病以來，人們就一直在探究股骨頭壞死（Osteonecrosisofthefemoralhead，ONFH）與酒精之間的關系。1968年Jones發(fā)現(xiàn)酒精中毒引起的股骨頭軟骨下骨壞死具備骨壞死的所有特征。近年來，伴隨著人民生活水平的提高，飲酒的人愈來愈多，酒精的消耗量也不斷增加，酒精性股骨頭壞死患者在逐年增加?，F(xiàn)在已有明確證據(jù)顯示酒精為導致股骨頭壞死的

2、病因之一。
　　關于股骨頭壞死的發(fā)病機理學說有多種，如脂肪栓塞學說、高凝低纖溶學說、骨內高壓及靜脈瘀滯學說、微血管損傷學說以及骨質疏松學說等。以往人們研究酒精性ONFH的病理變化，發(fā)現(xiàn)早期酒精性ONFH股骨頭內脂肪髓（脂肪堆積），脂質代謝紊亂，脂肪細胞增殖肥大，壓迫毛細血管及血管竇，造成骨內高壓及靜脈回流障礙。進一步研究發(fā)現(xiàn)酒精調控股骨頭細胞內成脂基因表達升高，成骨基因表達下降，并且酒精誘導骨髓多功能干細胞系成脂分化，抑制其成骨分

3、化，加重股骨頭內脂肪堆積而骨修復不足的病理過程從而導致股骨頭的缺血壞死。晚期酒精性ONFH(ARCOⅢ-Ⅳ期)病理表現(xiàn)典型:軟骨下骨折，骨量減少，壞死區(qū)面積特別大，有大塊壞死骨，周圍修復硬化帶明顯，股骨頭塌陷、變形。但是目前尚不清楚壞死區(qū)骨組織細胞中相關基因的表達情況，國內外文獻亦未見報道。故本研究收集人類酒精性ONFH患者股骨頭標本，采用實時熒光定量-聚合酶鏈反應(RT-qPCR)技術檢測股骨頭壞死區(qū)內骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（BMP-2）

4、、成骨轉錄因子-2(Runx-2)、過氧化物酶體增殖子活化受體-γ(PPAR-γ)、護骨素(osteoprotegerin，OPG)、破骨細胞分化因子(receptoractivatorofNF.KBligand，RANKL)mRNA的表達情況，進一步探討晚期酒精性ONFH壞死區(qū)骨組織細胞中相關基因表達的變化，對晚期酒精性ONFH治療措施的選擇有一定的參考價值。
　　材料與方法:
　　2013年1月～2013年6月，收集10

5、例ARCOⅢ-Ⅳ期(ARCOⅢ-B期3例，ARCOⅢ-C期3例，ARCOⅣ期4例)酒精性股骨頭壞死患者股骨頭骨組織和10例GardenⅢ-Ⅳ期（GardenⅢ期5例，GardenⅣ期5例）新鮮股骨頸骨折患者股骨頭骨組織，分別作為實驗組和對照組。實驗組為晚期酒精性股骨頭壞死患者，男8例，女2例，年齡33～60歲，平均45歲，無激素應用史、感染、創(chuàng)傷等其他病史。對照組男6例，女4例，年齡44～70歲，平均52歲，術前病程3-7天，平均5天，

6、無飲酒史、激素應用史及其他病史。實驗中觀察股骨頭大體標本形態(tài)，壞死區(qū)面積大小、顏色、質地，再采用RT-qPCR技術分別測定兩組股骨頭骨組織中BMP-2、Runx-2、PPAR-γ、OPG、RANKLmRNA的相對表達量。
　　結果:
　　RT-qPCR檢測各目的基因的Ct值，最后采用2-ΔΔCt法分析實驗組相對于對照組目的基因表達變化的倍數(shù)，本實驗結果顯示實驗組壞死區(qū)骨組織中BMP-2、Runx-2、PPAR-γ、OPG、R