抗癌藥冬凌草甲素聚乳酸納米粒的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、冬凌草甲素(oridonin，ORI)為唇形科香茶菜屬植物冬凌草(Rabdosia rubescens)的主要抗癌有效成分，分子中與環(huán)外亞甲基共軛的環(huán)戊酮結(jié)構(gòu)是其抗癌活性中心。體外研究表明ORI抗癌譜較廣，可通過(guò)多種途徑誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，對(duì)人肝癌BEI-7402細(xì)胞，非小細(xì)胞肺癌組織NCI-H520、NCI-H460、NCI-H1299，人白血病HL-60細(xì)胞，食管癌CaES-17細(xì)胞及結(jié)腸癌HCT8細(xì)胞等均有明顯細(xì)胞毒作用，臨床上也顯示

2、了一定療效。 冬凌草甲素來(lái)源于天然植物，成分含量低，提取工藝復(fù)雜，原料的短缺已成為制約其深入研究的因素之一。同時(shí)，由于ORI的水溶性差，體內(nèi)生物半衰期短，目前有關(guān)制劑的抗癌療效尚不理想，需進(jìn)行深入研究。 針對(duì)上述問(wèn)題，本文首次將超臨界CO<,2>萃取與柱層析分離技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用于ORI的提取與分離，使ORI的制備工藝大大簡(jiǎn)化，對(duì)推動(dòng)ORI向工業(yè)化生產(chǎn)方向發(fā)展具有重要意義。本文以O(shè)RI的提取率為考察指標(biāo)，對(duì)夾帶劑的種類(lèi)和萃取時(shí)

3、間進(jìn)行了單因素考察，確定以95％乙醇為夾帶劑效果最理想，萃取時(shí)間為3小時(shí)。通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)對(duì)超臨界CO<,2>的萃取工藝進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳工藝條件為：壓力38.5 MPa，溫度40℃，夾帶劑用量1.5 ml·g<'-1>。收集萃取所得產(chǎn)物用硅膠柱層析技術(shù)進(jìn)一步分離，將所得結(jié)晶利用紅外光譜，紫外光譜和核磁共振波譜等手段進(jìn)行鑒定，結(jié)果證實(shí)所得結(jié)晶為冬凌草甲素，HPLC面積歸一化法測(cè)得樣品純度為(98.2±0.5)％，能夠滿足醫(yī)藥應(yīng)用要求。

4、 以冬凌草甲素為實(shí)驗(yàn)藥物，以具有良好生物相容性和生物可降解性的聚乳酸(polylactic-acid，PLA)為載體材料，采用改良的自乳化溶劑擴(kuò)散法制備了冬凌草甲素聚乳酸納米粒(ORI-PLA-NP)。實(shí)驗(yàn)以包封率為主要考察指標(biāo)，通過(guò)均勻設(shè)計(jì)法對(duì)處方工藝進(jìn)行了優(yōu)化，確定最佳處方工藝為：Poloxamer 188％=1.0％，有機(jī)相：水相=O.7，藥物：有機(jī)相=0.5，PLA：藥物=10，丙酮：乙醇=0.6，轉(zhuǎn)速=400 rmin<

5、'-1>。優(yōu)化工藝操作簡(jiǎn)單，所制備的ORI-PLA-NP包封率穩(wěn)定，平均包封率為(91.884±1.83)％，載藥量為(2.324±0.05)％，透射電鏡下觀察所得納米粒為類(lèi)球形實(shí)體，表面光滑不粘連，粒徑分布的范圍較窄，平均粒徑為137.3 nm，Zeta電位為(-15.884±0.41)mV，pH值為(5.57±0.04)，粘度為(1.2314±0.002)×10<'-3>Ns·m<'-2>。 為提高所制備ORI-PLA-NP的

6、儲(chǔ)存穩(wěn)定性，本文進(jìn)一步對(duì)所制得的ORI-PLA-NP進(jìn)行了凍干處理，并以外觀、色澤、再分散性為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)凍干工藝進(jìn)行了單因素考察，最終確立的凍干工藝為：以6％的甘露醇為凍干保護(hù)劑，預(yù)凍溫度-80℃，預(yù)凍時(shí)間24h，冷凍干燥時(shí)間32h。凍干前后納米粒的各主要理化性質(zhì)的比較結(jié)果表明，凍干工藝對(duì)ORI-PLA-NP的包封率、載藥量、pH值、粘度和表面電位不會(huì)造成顯著影響。對(duì)凍干品的DSC和X-射線衍射分析結(jié)果表明，制成納米粒后ORI已被載體

7、包裹，并主要以分子狀態(tài)或無(wú)定型狀態(tài)分散于載體介質(zhì)中。用超速離心法對(duì)OR/-PLA-NP凍干品的體外釋藥特性進(jìn)行了研究，結(jié)果表明ORI-PLA-NP的體外釋藥具有緩釋制劑特征，符合Higuchi方程：Q=8.944t<'1/2>+11.246，r=0.9883。初步穩(wěn)定性考察結(jié)果表明ORI-PLA-NP凍干品可在3-5℃，20-25℃條件下保存3個(gè)月。 本文采用HPLC法，分別測(cè)定了小鼠尾靜脈注射ORI-Sol和ORI-PLA-