半乳糖介導(dǎo)的冬凌草甲素白蛋白納米粒的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、冬凌草甲素(oridonin，ORI)是從唇形科香茶菜屬植物冬凌草(Rabdosiarubescens)中分離得到的貝殼杉烯二萜類化合物。近年來，許多研究顯示冬凌草甲素對許多腫瘤細(xì)胞具有明顯的抑制作用，特別是在治療肝癌和白血病等方面。臨床上唯一的冬凌草甲素注射液（癌得寧）曾被用于各種癌癥的治療，但由于冬凌草甲素的溶解性較差，注射液需要加入表面活性劑和有機(jī)溶劑來提高其溶解性，長期靜脈滴注會引起許多不良反應(yīng)，治療指數(shù)低，一度被迫停用。因此亟

2、需研究新的制劑技術(shù)來克服這些問題，幫助冬凌草甲素發(fā)揮其抗腫瘤的作用，使其重新進(jìn)入臨床應(yīng)用。
　　白蛋白納米粒以其獨(dú)特的優(yōu)勢引起了藥劑工作者越來越多的關(guān)注，目前已經(jīng)有上市的劑型:紫杉醇人血清白蛋白納米粒注射劑。該劑型主要用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的治療，臨床用藥顯示了其優(yōu)良的治療效果。本文設(shè)計(jì)的思路是制備冬凌草甲素的白蛋白納米粒，另外，在白蛋白上引入半乳糖，利用半乳糖受體介導(dǎo)的肝靶向作用實(shí)現(xiàn)冬凌草甲素用于肝癌的靶向治療。
　　本課題

3、首先利用牛血清白蛋白結(jié)構(gòu)中的氨基和乳糖酸結(jié)構(gòu)中的羧基進(jìn)行酰胺化反應(yīng)，合成了半乳糖基化牛血清白蛋白(galactosylated bovineserumalbumin，GB)。以冬凌草甲素為模型藥物，GB為載體材料，制備了半乳糖介導(dǎo)的冬凌草甲素白蛋白納米粒(Oridonin-loaded galactosylated bovineserumalbumin nano particles，ORI-GB-NP)。以粒徑和包封率為主要考察指標(biāo)，通

4、過單因素考察法對處方工藝進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳處方并考察了在最佳處方下制備所得納米粒的粒徑、Zeta電位、包封率和載藥量、表面形態(tài)和穩(wěn)定性等特點(diǎn)。為了提高制劑的穩(wěn)定性，將ORI-GB-NP溶液進(jìn)行冷凍干燥，并對凍干保護(hù)劑的種類、用量進(jìn)行了篩選;采用DSC和XRD研究了ORI-GB-NP凍干制劑的晶型結(jié)構(gòu);考察了ORI-GB-NP凍干制劑的體外釋放;同時對ORI-GB-NP凍干制劑的初步穩(wěn)定性進(jìn)行了研究。最后，以冬凌草甲素溶液和冬凌草甲素白蛋

5、白納米粒為對照組，考察了半乳糖介導(dǎo)的冬凌草甲素白蛋白納米粒經(jīng)尾靜脈注射后在大鼠體內(nèi)的藥物動力學(xué)特征和小鼠的體內(nèi)分布情況。
　　通過單因素考察所得的優(yōu)化工藝為:稱取75mgGB溶于水(pH為9)中攪拌溶解。取ORI用乙醇溶解，并加入至GB溶液中。于25℃恒溫水浴中在500～600r·min-1的電動攪拌下以0.7mL·min-1的滴速滴加無水乙醇至一定比例。然后加入0.5％戊二醛溶液進(jìn)行交聯(lián)固化，繼續(xù)攪拌24h，40℃減壓蒸餾除去乙

6、醇。最后用超濾管除去游離的ORI及殘留戊二醛，用蒸餾水稀釋至原體積，即得ORI-GB-NP納米粒溶液。ORI-BSA-NP的制備方法同上，只是在水相中不加GB，而是加入BSA。優(yōu)化工藝操作簡單方便，所制備的納米粒包封率穩(wěn)定，ORI-BSA-NP和ORI-GB-NP的平均包封率分別為66.7±0.4％、63.5±0.7％，載藥量分別為4.3±0.03％、4.1±0.04％。平均粒徑分別為164.5±6.5nm、172.0±8.3nm，Ze

7、ta電位分別為-25.39±1.62mV、-31.48±2.15mV。透射電鏡下觀察ORI-BSA-NP和ORI-GB-NP均為類球形結(jié)構(gòu)，粒徑分布較均勻。
　　ORI-GB-NP的凍干工藝為:向ORI-GB-NP溶液中加入5％(w/v)甘露醇作為凍干保護(hù)劑，振搖使其溶解并分裝置西林瓶中。首先在-80℃的超低溫冰箱中預(yù)凍24h，然后迅速取出置于真空冷凍干燥機(jī)中(-50℃、0.25mbar)凍干48h，即得ORI-GB-NP的凍干粉

8、針制劑。DSC、XRD對ORI-GB-NP的分析結(jié)果表明，ORI在ORI-GB-NP凍干品中以無定型形式存在，說明制成納米粒后ORI已被載體包裹或吸附完全。將ORI-GB-NP凍干粉針劑分別于4℃、20～25℃條件下貯存三個月后，仍為白色疏松的粉末且色澤均勻，粒徑和包封率幾乎不變，具有良好的穩(wěn)定性。以透析法考察ORI-GB-NP凍干粉針劑的體外釋藥特性，結(jié)果表明ORI-GB-NP的體外釋放具有緩釋制劑的特征。
　　大鼠體內(nèi)藥物動力

9、學(xué)研究表明ORI-BSA-NP、ORI-GB-NP與ORIsolution的血藥濃度-時間曲線明顯不同。靜脈注射ORIsolution后，血藥濃度下降較快，曲線較陡，平均滯留時間(MRT)很短僅為2.56h，清除率(CLz)為0.678L·h-1·Kg-1，藥時曲線下面積(AUC)為29.51h·μg·mL-1。靜脈注射ORI-BSA-NP后，MRT、CLz、AUC分別為5.65h、0.286L·h-1·Kg-1、48.96h·μg·m

10、L-1。與ORIsolution相比，ORI-BSA-NP的AUC增加，MRT延長，而清除率則下降。靜脈注射ORI-GB-NP后，MRT、CLz、AUC分別為6.57h、0.224L·h-1·Kg-1、62.42h·μg·mL-1。與ORIsolution和ORI-BSA-NP相比，ORI-GB-NP的AUC增加，MRT延長，清除率也有所下降。說明將ORI制成白蛋白納米粒后可以緩慢地釋放藥物，降低消除速度，延長ORI在大鼠體內(nèi)的循環(huán)時間

11、，提高冬凌草甲素的生物利用度。
　　小鼠尾靜脈注射ORI-BSA-NP、ORI-GB-NP與ORIsolution后體內(nèi)分布情況表明，與ORIsolution組比較，ORI-BSA-NP在小鼠體內(nèi)主要器官的相對攝取率依次（從低到高）為肺(0.78)、腎(0.91)、心(0.92)、脾(2.61)、肝(3.65);ORI-GB-NP在小鼠體內(nèi)主要器官的相對攝取率依次（從低到高）為腎(0.63)、肺(0.71)、心(0.82)、脾(1

12、.74)、肝(5.47)。ORI-BSA-NP和ORI-GB-NP都顯示出明顯的肝靶向性，而ORI-GB-NP的肝靶向效果更加明顯。由結(jié)果可知，ORI制備成白蛋白納米粒特別是半乳糖介導(dǎo)的白蛋白納米粒后，可以增加藥物向肝臟的分布，提高制劑的肝靶向作用，同時降低藥物對其他臟器的毒副作用。
　　以冬凌草甲素為模型藥物制備具有肝靶向作用的半乳糖修飾的牛血清白蛋白納米粒，目前國內(nèi)外尚未見報道。研究成果將為進(jìn)一步研究牛血清白蛋白納米粒載藥系統(tǒng)