葉酸偶聯(lián)白蛋白cypate納米粒的構(gòu)建及靶向膀胱癌光熱殺傷效應(yīng)的實驗研究.pdf

1、 分 類 號 學(xué)號 學(xué)號 D201378289 D201378289 學(xué)校代碼 學(xué)校代碼 10487 10487 密級 密級 博 士 學(xué) 位 論 文 論文題目 葉酸 葉酸偶聯(lián) 偶聯(lián)白蛋白 白蛋白 cypate cypate 納米粒 納米粒的構(gòu)建及靶向 的構(gòu)建及靶向膀胱癌 膀胱癌 光熱殺傷效應(yīng)的實驗研究 光熱殺傷效應(yīng)的實驗研究 學(xué) 位 申 請 人 ： 學(xué)

2、位 申 請 人 ： 朱偉 朱偉 學(xué) 科 專 業(yè) ： 學(xué) 科 專 業(yè) ： 泌尿外科 泌尿外科(專業(yè)型 專業(yè)型) 指 導(dǎo) 教 師 ： 指 導(dǎo) 教 師 ： 曾甫清 曾甫清 答 辯 日 期 ： 答 辯 日 期 ： 2016.5. 2016.5.13 13 華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文 1 葉酸 葉酸偶聯(lián) 偶聯(lián)白蛋白 白蛋白 cypate cypate 納米粒 納米粒的構(gòu)建及靶向 的構(gòu)建及靶向膀胱癌 膀胱癌 光熱 光熱殺傷效應(yīng)的

3、實驗研究 殺傷效應(yīng)的實驗研究 中文摘要 中文摘要 目的 目的: 基于 Cypate 的光熱轉(zhuǎn)換效應(yīng)， 本文構(gòu)建了一種新型有機光熱納米材料葉酸偶聯(lián)白蛋白 Cypate（即 FA-BSA-Cypate）納米顆粒，由于葉酸和 cypate 能同時結(jié)合于牛血清白蛋白（BSA）的不同位點而被 BSA 運輸?shù)襟w內(nèi)，因腫瘤的 EPR 效應(yīng)及葉酸與其受體的特異性結(jié)合而使膀胱腫瘤細(xì)胞更有效地攝取納米粒中的 cypate，體外及體內(nèi)實驗證實 FA-BSA-

4、Cypate 納米粒對膀胱腫瘤的靶向光熱殺傷效應(yīng)，探究其作用機制，有望為后期臨床應(yīng)用提供重要的理論基礎(chǔ)。 方法 方法:（1）合成有機材料 Cypate 并通過 1H-NMR 進行表征，溶劑透析法制備葉酸偶聯(lián)白蛋白 Cypate 納米顆粒，透射電子顯微鏡(TEM)對葉酸偶聯(lián)白蛋白 Cypate 納米顆粒的形態(tài)進行表征，動態(tài)光散射儀(DLS) 測定納米粒粒徑分布，紫外分光光度法測量FA-BSA-Cypate 納米粒載藥量，觀察不同濃度 FA

5、-BSA-Cypate 納米粒溶液(0、1、10、100μg/ml)在 808nm 激光(1.5W/cm2)照射下溫度隨時間變化，證實 FA-BSA-Cypate 納米粒的光熱升溫效應(yīng)。 （2）細(xì)胞免疫熒光法檢測人膀胱癌 5637 細(xì)胞膜葉酸受體(FA-α receptor)的表達(dá)，紫外分光光度法測定 5637 細(xì)胞對 FA-BSA-Cypate 納米粒、BSA-Cypate 納米粒的攝取量隨時間變化，進一步應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡觀察 5

6、637 細(xì)胞對 FA-BSA-Cypate 納米粒、BSA-Cypate 納米粒的攝取情況。 （3）MTT 法比較不同濃度FA-BSA-Cypate復(fù)合納米粒對5637細(xì)胞的細(xì)胞毒性， MTT法檢測FA-BSA-Cypate納米粒不同濃度、 不同光照時間以及不同能量 808 nm 的近紅光照射所誘導(dǎo)的對 5637細(xì)胞的光熱殺傷效應(yīng)。 （4）DHE（Dihydroethidium）染色觀察 FA-BSA-Cypate 納米粒經(jīng)近紅外光（N