姜黃素抑制IFN-γ誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞內(nèi)吲哚胺2，3-雙加氧酶表達(dá)的機(jī)制初探.pdf

1、吲哚胺2,3-雙加氧酶(Indoleamine2,3-dioxygenase，IDO)是一種廣泛存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞質(zhì)中的血紅素蛋白。作為色氨酸代謝過程的首要限速酶，它能催化分解色氨酸使其沿著犬尿氨酸途徑降解成一系列的代謝產(chǎn)物。在機(jī)體處于病毒感染、細(xì)菌感染和癌變等病理?xiàng)l件下，體內(nèi)的IDO由干擾素-γ(IFN-γ)等細(xì)胞因子誘導(dǎo)而過量表達(dá)，導(dǎo)致局部色氨酸濃度下降并產(chǎn)生一系列有毒代謝產(chǎn)物。巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞在受到腫瘤抗原的刺激時(shí)，通過產(chǎn)生I

2、DO改變微環(huán)境內(nèi)色氨酸及其代謝產(chǎn)物的局部濃度，從而抑制T細(xì)胞的腫瘤抗原特異性克隆增殖并促進(jìn)其凋亡；而腫瘤細(xì)胞在IFN-γ刺激下產(chǎn)生的IDO也能夠使其免受機(jī)體免疫系統(tǒng)的攻擊。因此，目前很多學(xué)者認(rèn)為IDO的高表達(dá)是導(dǎo)致機(jī)體對(duì)腫瘤產(chǎn)生免疫耐受的重要因素之一，而后者是影響腫瘤免疫治療效果的重要因素，本研究通過對(duì)姜黃素抑制IFN-γ誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞內(nèi)IDO表達(dá)的機(jī)制進(jìn)行初步探討，力求能發(fā)現(xiàn)調(diào)控IDO表達(dá)的特異性靶點(diǎn)，為解除機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫耐受，提高腫

3、瘤免疫治療的效果做出貢獻(xiàn)。
　　 目的：本研究主要目的是通過研究姜黃素對(duì)IFN-γ誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞內(nèi)吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)表達(dá)的影響，并且對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步的探討，力求能夠發(fā)現(xiàn)調(diào)控IDO表達(dá)的分子機(jī)制與信號(hào)通路，同時(shí)研究低濃度的姜黃素對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響。
　　 方法：
　　 1)利用低濃度(10-40μM)的姜黃素作用于人乳腺癌A431細(xì)胞、人宮頸癌HeLa細(xì)胞、人肝癌HepG2細(xì)胞、人鼻咽癌細(xì)胞CN

4、E224h，通過四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色檢測(cè)姜黃素對(duì)這些腫瘤細(xì)胞增殖的影響；
　　 2)采取蛋白免疫印記技術(shù)(Western Blot)檢測(cè)姜黃素對(duì)IFN-γ誘導(dǎo)上述腫瘤細(xì)胞內(nèi)IDO表達(dá)的影響；
　　 3)在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平上，通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)姜黃素對(duì)IFN-γ誘導(dǎo)IDO表達(dá)的關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄因子-干擾素應(yīng)答因子1(InterferonResponsive Factor-1,IRF-1)表達(dá)的影

5、響。
　　 結(jié)果：姜黃素在低濃度范圍內(nèi)(10-40μM)對(duì)CNE2、HeLa、A431、HepG2腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)有抑制作用，但其抑制率不高，約在1％-20％，在此濃度范圍內(nèi)對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)影響較小，有利于姜黃素對(duì)腫瘤細(xì)胞內(nèi)作用的分子機(jī)制進(jìn)行研究。此外，姜黃素能夠抑制IFN-γ誘導(dǎo)這些腫瘤細(xì)胞內(nèi)IDO的表達(dá)，但是每種腫瘤細(xì)胞的敏感度不一樣，姜黃素濃度在30uM，20uM、20uM，20uM時(shí)分別能對(duì)CNE2、HeLa、A431、H

6、epG2等腫瘤細(xì)胞的IFN-γ誘導(dǎo)的IDO表達(dá)有明顯的抑制作用，但是在這四種細(xì)胞株中，當(dāng)姜黃素濃度為30uM時(shí)，IFN-γ誘導(dǎo)表達(dá)的IDO都能夠完全被抑制。在進(jìn)一步的機(jī)制研究中，我們通過RT-PCR和Western bloting檢測(cè)HeLa細(xì)胞在IFN-y或姜黃素的作用下對(duì)IRF-I表達(dá)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)IFN-γ能夠誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞內(nèi)IRF-1的表達(dá)，但是姜黃素并不能抑制這一過程。由此，我們推斷，姜黃素并不通過直接影響HeLa細(xì)胞內(nèi)I

7、RF-1的表達(dá)而抑制IFN-γ誘導(dǎo)的IDO表達(dá)，提示姜黃素有可能通過影響其他轉(zhuǎn)錄因子的活性而調(diào)控IDO的表達(dá)。
　　 結(jié)論：在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)姜黃素能抑制A431、HeLa、HepG2、CNE2腫瘤細(xì)胞內(nèi)IFN-γ誘導(dǎo)的IDO表達(dá)，而IDO的高表達(dá)是導(dǎo)致機(jī)體對(duì)腫瘤產(chǎn)生免疫耐受的重要因素之一，因此，本研究必將能夠發(fā)現(xiàn)調(diào)控IDO表達(dá)的特異性靶點(diǎn)，為解除機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫耐受，提高腫瘤免疫治療的效果做出貢獻(xiàn)。同時(shí)，由于姜黃素能抑制上述