吲哚胺2，3-雙加氧酶在乳腺癌中的表達(dá)及其與腫瘤血管形成關(guān)系的初步研究.pdf

1、目的:
　　 研究吲哚胺2,3-雙加氧酶(Indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)在乳腺癌中的表達(dá)及相應(yīng)組織內(nèi)的CD31、CD105標(biāo)記的腫瘤微血管密度(microvesseldensity,MVD),明確乳腺癌中IDO蛋白的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系及其預(yù)后的意義,同時(shí)尋找IDO與MVD之間的關(guān)系。利用Transwell小室,建立表達(dá)IDO的腫瘤細(xì)胞MCF-7與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC共培養(yǎng)模型,檢測腫瘤

2、細(xì)胞分泌的IDO對HUVEC的增殖、CD105表達(dá)情況及成管能力的影響,探討IDO在乳腺癌血管形成過程中發(fā)揮的作用及可能機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.收集天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院2004年1月手術(shù)切除的乳腺癌石蠟切片40例,免疫組織化學(xué)法檢測IDO、CD31、CD105的表達(dá)情況,觀察IDO表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系及其預(yù)后的意義,同時(shí)分析IDO表達(dá)與MVD的關(guān)系。
　　 2.半定量RT-PCR法檢測IDO基因的

3、表達(dá)情況,篩選表達(dá)IDO的乳腺癌細(xì)胞系。
　　 3.建立表達(dá)IDO的人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC共培養(yǎng)模型,利用IDO抑制劑1-甲基色氨酸(1-MT)阻滯IDO活性,細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測MCF-7分泌的IDO作用后HUVEC增殖情況,流式細(xì)胞儀檢測CD105表達(dá)率變化,基質(zhì)膠實(shí)驗(yàn)觀察HUVEC形成管樣結(jié)構(gòu)能力的變化情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.免疫組化結(jié)果顯示乳腺癌組織中IDO蛋白表達(dá)率為67

4、.5％(27/40),低表達(dá)或不表達(dá)率為32.5％(13/40)。乳腺癌組織中IDO表達(dá)水平與患者臨床分期和腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P<0.05)。
　　 2.乳腺癌組織中IDO蛋白高表達(dá)組的患者3年、5年無瘤生存率均低于IDO蛋白不表達(dá)或低表達(dá)組,分別為88.9％(24/27)與100％(13/13)、85.2％(23/27)與92.3％(12/13),但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.乳腺癌組織中IDO表達(dá)水平與CD1

5、05標(biāo)記的MVD(MVD-CD105)正相關(guān)(rs=0.659,P<0.05),與CD31標(biāo)記的MVD(MVD-CD31)無關(guān)。
　　 4.RT-PCR結(jié)果顯示:人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231、MDA-MB-435S、MDA-MB-453、SK-Br-3、MCF-7、T47D、ZR-75-1中,MCF-7、MDA-MB-435S、T47D的IDO表達(dá)水平較其余細(xì)胞系高。
　　 5.利用Transwell小室,建立表達(dá)

6、IDO的人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC共培養(yǎng)模型,使用IDO抑制劑1-甲基色氨酸(1-MT)阻滯IDO活性,通過倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),同時(shí)利用細(xì)胞計(jì)數(shù)法繪制HUVEC細(xì)胞生長曲線發(fā)現(xiàn):MCF-7共培養(yǎng)后HUVEC增殖明顯,加入1-MT后這種增殖作用幾乎完全被抑制。
　　 6.流式細(xì)胞檢測結(jié)果顯示:HUVEC細(xì)胞表達(dá)CD105,48h表達(dá)率最高；MCF-7共培養(yǎng)后促進(jìn)HUVEC細(xì)胞表面CD105的表達(dá),48

7、h作用最明顯；加入1-MT后CD105的表達(dá)率降低。
　　 7.基質(zhì)膠成管實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:HUVEC可以形成管樣結(jié)構(gòu)；MCF-7共培養(yǎng)后管樣結(jié)構(gòu)形成增加,24h作用最明顯；加入1-MT組幾乎無管樣結(jié)構(gòu)形成。
　　 結(jié)論:
　　 1.乳腺癌組織中IDO蛋白表達(dá)率為67.5％(27/40),且其表達(dá)水平與腫瘤臨床分期和腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P<0.05),IDO高表達(dá)組的3年、5年無瘤生存率均低于IDO不表達(dá)或低表達(dá)

8、組,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示腫瘤組織中IDO的表達(dá)水平與乳腺癌的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移相關(guān)。
　　 2.乳腺癌組織中IDO表達(dá)與MVD-CD105正相關(guān)(rs=0.659,P<0.05),與MVD-CD31無關(guān),提示IDO可能通過促進(jìn)腫瘤新生血管形成進(jìn)而加速腫瘤的進(jìn)展,同時(shí)說明CD105標(biāo)記的腫瘤新生血管可能較CD31所標(biāo)記的血管對腫瘤轉(zhuǎn)移的意義更大。
　　 3.人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231、MDA-MB-435S、MDA-M