黃芪多糖對(duì)TNBS誘導(dǎo)大鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的治療作用及對(duì)免疫功能的影響.pdf

1、研究背景：
　　 炎癥性腸?。╥nflammatoryboweldisease，IBD）是常見且危害嚴(yán)重的消化系統(tǒng)疾病，近年來我國(guó)發(fā)病率呈明顯上升。免疫調(diào)節(jié)異常在其發(fā)病機(jī)制中起了重要的作用。傳統(tǒng)藥物治療如5-氨基水楊酸、糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑以及新型生物制劑如英夫利昔(Infliximab)療效肯定，但仍有小部分患者療效不好，尤其是克羅恩病(Crohn'sdisease，CD)的長(zhǎng)期維持緩解療效較差。近年來，中醫(yī)基礎(chǔ)和臨床研究發(fā)

2、展迅速，在IBD治療方面取得了較好的療效。黃芪為最常用的幾種中藥之一，被譽(yù)為“補(bǔ)氣之最”、“瘡家圣藥”。已有研究發(fā)現(xiàn)黃芪提取物可以預(yù)防和治療實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎，但關(guān)于其主要生物活性成份一黃芪多糖(Astragaluspolysaccarides，APS)，對(duì)實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的治療效果及免疫機(jī)制目前尚無研究。
　　 研究目的：
　　 探討APS對(duì)2,4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)誘導(dǎo)的大鼠結(jié)腸炎的療效及免疫機(jī)制。
　　 研

3、究方法：
　　 1．建立大鼠TNBS實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎模型。40只SD雄性大鼠隨機(jī)分為5組(n=8)，分別為空白對(duì)照組、TNBS造模組、APS小劑量組、APS大劑量組和激素組?？瞻讓?duì)照組給予生理鹽水灌腸，余4組給予TNBS灌腸。建模24小時(shí)后開始給予藥物干預(yù)，APS小劑量組給予APS(0.5g/Kg.d)灌胃，APS大劑量組給予APS(1.0g/Kg.d)灌胃，激素組給予潑尼松(1.0mg/Kg.d)灌胃，造模組給予相同容積飲用水灌胃

4、，療程14天。每天觀察大鼠體重、腹瀉及便血情況，給藥結(jié)束后處死動(dòng)物。
　　 2．療效評(píng)價(jià)：觀察結(jié)腸大體病變及鏡下病理標(biāo)本炎癥情況，測(cè)定腸道組織MPO活性。
　　 3．免疫機(jī)制研究：提取結(jié)腸組織總蛋白，應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)IL-4、IL-10的水平，并用免疫組化和免疫印跡方法檢測(cè)腸道組織中轉(zhuǎn)錄因子T-bet和GATA-3的表達(dá)。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　 1．造模組大鼠結(jié)腸大體病變及鏡下病理炎癥評(píng)分，MPO

5、活性均顯著高于對(duì)照組(P=0.01)。APS小劑量治療可減輕結(jié)腸大體及鏡下炎癥病變，但和對(duì)照組及造模組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；可顯著降低MPO活性(P=0.03)。APS大劑量組大體及鏡下炎癥病變?cè)u(píng)分與造模組接近，MPO活性顯著高于對(duì)照組和APS小劑量組(P=0.003，0.008)。激素組大體、鏡下炎癥病變?cè)u(píng)分以及MPO活性均較造模組下降，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2．造模組大鼠較對(duì)照組IL-4、IL-10水平下降，其中IL-10

6、與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.007)，APS小劑量治療可升高IL-4、IL-10水平，但與造模組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；APS大劑量治療使IL-4進(jìn)一步下降，但I(xiàn)L-10略有升高，與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.046，0.035);激素組IL-4、IL-10均較造模組進(jìn)一步下降，與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.049，0.001)。
　　 3．對(duì)照組大鼠腸道GATA-3表達(dá)高于T-bet表達(dá)，造模組T-bet和GATA-3

7、較對(duì)照組均有升高，以T-bet升高較明顯，使GATA-3/T-bet比值顯著下降（P=0.025）。APS小劑量治療可同時(shí)促進(jìn)T-bet和GATA-3表達(dá)，與造模組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.04，0.019)，但GATA-3表達(dá)升高更為顯著，使GATA-3/T-bet比值升高。激素組T-bet和GATA-3表達(dá)較造模組均下降，T-bet下降較為明顯，使GATA-3/Tbet比值較造模組升高。激素組GATA-3/T-bet比值高于APS

8、小劑量組。
　　 實(shí)驗(yàn)小結(jié)：
　　 1．不同劑量APS對(duì)TNBS誘導(dǎo)的大鼠結(jié)腸炎療效不同，小劑量(0.5g/Kg.d)灌胃治療2周可緩解TNBS誘導(dǎo)的大鼠結(jié)腸炎，療效與潑尼松接近；而大劑量(1.0g/Kg.d)治療則輕度加重大鼠結(jié)腸炎。
　　 2．APS小劑量治療可促進(jìn)抗炎細(xì)胞因子IL-4和IL-10的表達(dá)，大劑量則抑制IL-4表達(dá)，但I(xiàn)L-10略有升高。小劑量APS免疫調(diào)節(jié)作用與促進(jìn)轉(zhuǎn)錄因子GATA-3及T-b

9、et的表達(dá)增加有關(guān)，其對(duì)GATA-3促進(jìn)作用更明顯。
　　 3．潑尼松具有免疫抑制作用，可降低IL-4和IL-10的水平，并可抑制轉(zhuǎn)錄因子GATA-3和T-bet的表達(dá)，但對(duì)T-bet抑制作用更明顯。
　　 4．小劑量APS和潑尼松治療均可提高GATA-3/T-bet比值，有助于恢復(fù)Th1/Th2平衡，以激素的免疫調(diào)節(jié)作用更為顯著。
　　 結(jié)論：
　　 APS對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎具有雙向免疫調(diào)節(jié)作用，大劑量