血吸蟲卵對TNBS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎及腸細菌移位的影響.pdf

1、炎癥性腸病(inflammatory bowel disease，IBD)是一種非特異性胃腸道炎癥性疾病，發(fā)病率近年呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢，目前對其的研究成為胃腸疾病研究的熱點(hot point)之一。臨床上內(nèi)科治療主要藥物是糖皮質(zhì)激素和免疫抑制劑，目前還有特異性抗體，但效果有限。國外有學(xué)者對寄生蟲治療炎癥性腸病開始了初步的嘗試，國內(nèi)這方面的研究報道很少，對寄生蟲治療炎癥性腸病的機制方面的研究更少。基于以上研究背景，本研究探討血吸蟲卵對三

2、硝基苯磺酸(trinitrobenzesulfonic acid，TNBS)誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎的影響及可能的機制。 第一部分血吸蟲卵對邢S誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎的影響 目的：研究血吸蟲卵對小鼠結(jié)腸炎的預(yù)防作用，并初步探討其預(yù)防作用的機制。 方法： 建立三硝基苯磺酸誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎模型，實驗小鼠(n=50)隨機分成三組：正常對照組(A組，n=10)、TNBS+生理鹽水組(B組，n=20)、TNBS+血吸蟲卵組(C組

3、，n=20)。C組在造模前第14、3天分別給予腹腔注射冰凍滅活血吸蟲卵10，000個(1ml冰生理鹽水混懸液)。B組同時給予相同體積的冰生理鹽水腹腔注射。B組及C組小鼠予3mgTNBS溶液/只灌腸建立結(jié)腸炎模型，建模后第7天處死存活小鼠，觀察不三組小鼠結(jié)腸的大體形態(tài)、H-E染色光鏡下病理特征(Ameho-criteria評分法)；同時用熒光實時定量PCR(Realtime-Polymerase chain reaction，RT-PCR

4、)法測定結(jié)腸組織中的白細胞介素-10(interleukin-10，IL-10)及干擾素γ(interferon-γ，IFN-γ)活性，酶聯(lián)免疫吸附劑測定法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)測定血清中IL-10及IFN-γ活性。 結(jié)果：與B組死亡率50％相比，C組小鼠為20％，死亡率明顯下降(P<0.05)；結(jié)腸肉眼及組織病理炎癥程度明顯減輕，Ameho -criteria評分法結(jié)

5、腸組織病理評分B組4.18+0.8，C組1.58±0.5， (P<0.05)；C組較B組結(jié)腸組織及血清中的IFN-γ活性明顯下降(P<0.05)，IL-10活性明顯升高(P<0.05)。 結(jié)論： 血吸蟲卵能夠降低小鼠結(jié)腸炎模型的腸道炎癥，可能與血吸蟲卵升高結(jié)腸組織和血清中的IL-10活性，同時降低INF-γ活性有關(guān)。 第二部分小鼠TNBS結(jié)腸炎模型中腸細菌移位的初步研究 目的 腸細菌移位與全身性炎

6、癥反應(yīng)及腸粘膜損傷炎癥有關(guān)，為此我們觀察TNBS結(jié)腸炎模型中是否存在腸細菌移位，并進一步探討血吸蟲卵是否對細菌移位產(chǎn)生影響及可能的機制。 方法 實驗小鼠(n=30)隨機分成三組：正常對照組(A組，n=10)、TNBS+生理鹽水組(B組，n=10)、TNBS+血吸蟲卵組(C組，n=10)。干預(yù)措施及模型建立同第一部分，建模后第1天處死所有小鼠。小鼠心臟采血后在血瓊脂平板進行細菌培養(yǎng)；腸系膜淋巴結(jié)、肝臟、脾臟組織切開增菌及印

7、片，在血平板和伊紅美藍平板進行細菌培養(yǎng)分離，并用細菌鑒定儀確認。 結(jié)果 發(fā)生移位的細菌以大腸桿菌為主。A組小鼠有3只在腸系膜淋巴結(jié)培養(yǎng)出細菌，其他臟器和血培養(yǎng)均陰性；B組小鼠血培養(yǎng)陽性率為100％，臟器細菌培養(yǎng)中，腸系膜淋巴結(jié)80％(8/10)，肝90％(9/10)，脾30％(3/10)；C組移位血和臟器細菌培養(yǎng)陽性率分別為腸系膜淋巴結(jié)50％(5/10)，肝20％(2/10)，脾0％(0/10)，血培養(yǎng)20％(2/10)