同型半胱氨酸對實驗性結(jié)腸炎大鼠sTM和EPCR表達的影響.pdf

1、目的：
　　近年來潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis, UC）在我國發(fā)病率明顯上升，UC發(fā)病基礎(chǔ)尚有待于進一步的研究。在UC的病理生理過程中，腸粘膜微血管內(nèi)皮細胞通過蛋白C(protein C, PC)途徑對腸道炎癥和凝血機制進行調(diào)節(jié)。同型半胱氨酸（homocysteine, Hcy）是一種含硫氨基酸，通過抑制PC途徑中有關(guān)蛋白的表達，降低PC抗凝和抗炎作用，在心腦血管系統(tǒng)疾病的血栓形成過程中具有重要影響。由于IB

2、D患者腸道黏膜中Hcy水平較高，腸道黏膜微血栓形成在UC病理過程中具有重要作用，Hcy是否通過影響腸道黏膜中微血栓形成過程的相關(guān)因素，加重結(jié)腸炎癥反應(yīng)目前尚不明確。因此，本研究通過檢測Hcy對實驗性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜可溶性血栓調(diào)節(jié)蛋白(soluable thrombomodulin, sTM)、PC、游離蛋白S(free protein S, fPS)水平和內(nèi)皮細胞蛋白C受體(endothelial protein C receptor

3、, EPCR)表達的影響，探討Hcy在UC發(fā)病機制中的作用。
　　方法：
　　采用2,4,6-三硝酸苯磺酸(trinitro-benzene-sulfonic acid, TNBS)灌腸制備大鼠結(jié)腸炎模型。對照組以等體積的生理鹽水（NS）灌腸。SD大鼠分為4組，A組（正常對照組）：生理鹽水灌腸+生理鹽水皮下注射；B組（正常對照+Hcy注射組）：生理鹽水灌腸+Hcy皮下注射；C組（TNBS模型組）：TNBS/乙醇溶液灌腸+生理

4、鹽水皮下注射；D組（TNBS模型+Hcy注射）：TNBS/乙醇溶液灌腸+Hcy皮下注射。記錄大鼠糞便性狀及體重變化，以肉眼觀察或糞便隱血試紙檢測便血情況并進行疾病活動指數(shù)評分（disease activity index, DAI）；ELISA法檢測結(jié)腸炎大鼠血漿及結(jié)腸勻漿中Hcy和結(jié)腸黏膜中sTM、PC、fPS水平；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）檢測sTM和EPCRmRNA表達水平；免疫組化SP法檢測結(jié)腸組織中TM及EPCR表達

5、水平。
　　結(jié)果：
　　與正常對照組比較，TNBS結(jié)腸炎大鼠體重明顯減輕，出現(xiàn)不同程度的肉眼血便，DAI評分增高（P<0.05）。與正常對照組比較，TNBS模型組大鼠血漿和結(jié)腸組織Hcy水平明顯增高(P<0.01)。與正常對照+Hcy注射組比較，TNBS模型+Hcy注射組大鼠血漿及結(jié)腸組織Hcy水平顯著增加（P<0.01）。與正常對照組比較， TNBS結(jié)腸炎大鼠HI評分明顯增高（P<0.01），結(jié)腸MPO（P<0.01）水平

6、明顯增高。與正常對照組比較，TNBS模型組大鼠結(jié)腸黏膜sTM、PC水平明顯降低，fPS水平降低但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，與TNBS模型組比較，TNBS模型+Hcy注射組大鼠結(jié)腸黏膜sTM、PC、fPS水平顯著下降（P<0.05）。免疫組化及RT-qPCR檢測顯示，與TNBS模型組比較，TNBS模型+Hcy注射組大鼠結(jié)腸黏膜中TM和EPCR表達顯著降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　Hcy可能通過降低實驗性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜中P