植物表達(dá)載體pBI121-RC7的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化楊樹的研究.pdf

1、本研究利用幾丁質(zhì)酶RC7基因，構(gòu)建pBH21—RC7載體，并通過凍融法將其導(dǎo)入農(nóng)桿菌感受態(tài)中;同時(shí)建立湘林90(P.deltoides‘XL-90’)的離體再生系統(tǒng)，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，以湘林90葉片為受體，導(dǎo)入RC7基因，使轉(zhuǎn)基因植株獲得抗真菌病害的能力。
　　通過誘導(dǎo)腋芽分化，以獲得的葉片作為培養(yǎng)材料，進(jìn)行愈傷組織培養(yǎng)、不定芽生長(zhǎng)發(fā)育培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，經(jīng)過篩選，得出湘林90離體再生體系的最適培養(yǎng)基:
　　1)MS+6-BA1

2、.0mg·L-1+ TDZ0.005mg·L-1+蔗糖30g·L-1+瓊脂粉8g·L-1誘導(dǎo)湘林90帶腋芽的莖段;
　　2)1/2MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.2mg·L-1+TDZ0.01mg·L-1+蔗糖30g·L-1+瓊脂粉8g·L-1，誘導(dǎo)湘林90誘導(dǎo)愈傷組織;
　　3)MS+6-BA0.5mg·L-1+NAA0.2mg·L-1+蔗糖30g·L-1+瓊脂粉8g·L-1，誘導(dǎo)湘林90不定芽生長(zhǎng)發(fā)育;

3、>　　4)1/2MS+NAA0.3mg·L-1+蔗糖30g·L-1+瓊脂粉8g·L-1，誘導(dǎo)湘林90長(zhǎng)出理想根系。
　　本研究還以湘林90離體再生體系的建立為基礎(chǔ)，研究了其遺傳轉(zhuǎn)化的最優(yōu)條件:
　　1)湘林90葉片的Kan臨界濃度為20mg·L-1;
　　2)農(nóng)桿菌LBA4404在28℃，170rpm黑暗條件下?lián)u菌，19h可以達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng);
　　3)用OD600=0.6的菌液侵染時(shí)間15min，共培養(yǎng)3d。