水稻轉座子Pong Pbi121-TPAS ihpRNA載體的構建及農(nóng)桿菌介導的遺傳轉化.pdf

1、學校代碼：10200分類號：Q94研究生學號：密級：⑧東北埽葒大謄碩士學位論文200821482玉水稻轉座子PongpBll21TPASihpRNA載體的構建及農(nóng)桿菌介導的遺傳轉化TheconstructionofpBll21TI，ASihpRNAvectorofariceTnPongandAgrobacteriummediatedtransformationbyregenerationOIemDryonlcca兒US‘●●l●■●作者

2、：柴娜指導教師：學科專業(yè)：研究方向：學位類型：劉立俠教授植物學植物基因工程學歷碩士東北師范大學學位評定委員會2011年6月摘要轉座子是基因組內(nèi)可以移動和擴張的遺傳元件，是基因組中的重要組成部分，具有高度的重復性。近些年來，人們從水稻基因組中分離得到了一類很活躍的MITEs轉座子，即mPing。對mPing的研究將有助于我們對MITEs起源和轉座機制的理解，但是mPing本身不能編碼轉座酶，而是需要由與其相關的自主性轉座子提供，為其提供轉

3、座酶的是自主性轉座子Ping和Pong。為了進一步研究轉座子的作用，本文構建了水稻pBll21TPASihpRNA載體，利用農(nóng)桿菌介導的水稻遺傳轉化法獲得再生植株，并對轉基因植株的表型進行觀察和分子檢測，進而探討轉座子在植物生長發(fā)育中的作用。根據(jù)水稻pong堿基序列(NCBI：BK000586)設計引物，利用PCR擴增方法，以水稻，總DNA為模板，擴增了兩個目的基因片段TPAS1和TPAS2，兩片段長度均為222bp。對目的片段序列進行

4、鑒定，將片段1和片段2分別連接到中間載體pKANANIB臌體和pSP72載體上。從連有片段2的重組pSP72載體中酶切獲得片段3，并將其連接到連有片段1的重組pKANANIBAL載體上。最后將重組的pKANANIBAL載體進行酶切，獲得含有內(nèi)含子的pong基因片段，最終裝載蟄JpBll21表達載體上，構建成水稻pBll21TPASihpRNA表達載體。以水稻松前和124品種成熟胚誘導的愈傷組織為受體材料，利用農(nóng)桿菌介導技術將構建的pon

5、g轉化載體進行遺傳轉化，進而獲得轉基因植株。在本實驗中，優(yōu)化了水稻遺傳轉化，確認了農(nóng)桿菌最佳侵染濃度0D咖=02，侵染時間3min，共培養(yǎng)3d，預培養(yǎng)5—7d，卡納霉素篩選濃度35mg／L。本實驗共獲得16株轉化植株，其中3株為轉基因陽性，均是124品種，經(jīng)過PCR檢測，證實了外源基因已經(jīng)整合到水稻基因組中。從表型上來看，轉基因植株具有個體矮小，分蘗少，花期早，結籽率低的特點。經(jīng)過篩選獲得的轉基因植株，將為進一步研究水稻轉座子的活性與表