LCYE RNAi與反義BCH雙價植物表達載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化中國水仙的研究.pdf

1、中國水仙(Narcissus tazetta var.chinensis)隸屬石蒜科水仙屬，是法國水仙的變種，主要產(chǎn)于福建、浙江、上海等地，其中以漳州水仙最負盛名，是一類極具觀賞價值的經(jīng)濟植物。但由于中國水仙為三倍體，很難自然或人工雜交產(chǎn)生新品種，品種單一、品種退化等問題使中國水仙產(chǎn)業(yè)的發(fā)展受到很大限制。因此，開展中國水仙品種改良具有重大意義。隨著分子生物學(xué)的興起，植物基因工程技術(shù)成為中國水仙品種改良的新手段。本研究從漳州水仙花瓣中分離

2、得到花色相關(guān)基因LCYE保守區(qū)片段,以pCAM1301-antiBCH植物表達載體為基礎(chǔ)，構(gòu)建了LCYE RNAi及反義BCH雙價植物表達載體,并在優(yōu)化中國水仙遺傳轉(zhuǎn)化體系的基礎(chǔ)上,將其轉(zhuǎn)入中國水仙,獲得抗性植株,并進行了分子驗證，為開發(fā)中國水仙新種質(zhì)和花色改良提供技術(shù)基礎(chǔ)和理論參考。
　　主要研究內(nèi)容及得到的結(jié)果如下:
　　1.以中國水仙花葶為外植體，用載體pCAM1301-LCYB轉(zhuǎn)化中國水仙并對預(yù)培養(yǎng)時間、篩選方式及共

3、培養(yǎng)基激素組合等因素進行了優(yōu)化，結(jié)果表明：預(yù)培養(yǎng)3d，共培養(yǎng)基中激素組合為BA+2,4-D且延遲5d篩選的方式能提高轉(zhuǎn)化效率；
　　2.提取漳州水仙花瓣的RNA,反轉(zhuǎn)錄為cDNA,并以此為模板，根據(jù)已發(fā)表的LCYE基因全長序列設(shè)計引物擴增出423bp的LCYE保守片段，并利用pKANNEL質(zhì)粒及pBI121質(zhì)粒，以pCAM1301-antiBCH植物表達載體為基礎(chǔ)，構(gòu)建了LCYE RNAi及反義BCH雙價植物表達載體pCKB-an

4、tiBCH-LCYE RNAi；
　　3.以優(yōu)化了的遺傳轉(zhuǎn)化體系為基礎(chǔ)，將構(gòu)建好的pCKB-antiBCH-LCYE RNAi雙價植物表達載體轉(zhuǎn)入中國水仙。漳州水仙花葶經(jīng)預(yù)培養(yǎng)3d后，將其浸入含有pCKB-antiBCH-LCYE RNAi質(zhì)粒的農(nóng)桿菌中侵染10min,然后在共培養(yǎng)基（MS+2mg· L-1 BA+0.5 mg·L-12,4-D+100μm·L-1AS+3％蔗糖+0.7%瓊脂糖）中暗培養(yǎng)3d，共培養(yǎng)后將外植體轉(zhuǎn)移到