構建反義雙價TuMV—Nib和LFY基因植物表達載體轉春大白菜研究.pdf

1、大白菜雖是原產(chǎn)我國的重要蔬菜作物，但春大白菜育種國內起步較晚，生產(chǎn)上大多使用從日本、韓國進口的種子。雖有一定的耐抽薹，但不抗病毒病。在大白菜生產(chǎn)中，先期抽薹和后期病毒病重已經(jīng)成為亟待解決的問題。采用常規(guī)育種方法培育耐抽薹、抗病毒大白菜品種年限長、效率低。因此，結合常規(guī)育種方法，采用基因工程技術克隆相關基因，控制植物的開花和病毒的復制，創(chuàng)新大白菜抗病毒、耐抽薹種質材料，進而育成具有自主知識產(chǎn)權的商品性好、抗病毒病、冬性較強不易抽薹的春大白

2、菜育種材料和品種，打破國內春大白菜種子依靠進口的局面，均具有重要經(jīng)濟價值和現(xiàn)實意義。 本研究以中國春大白菜為材料，在采用RT-PCR技術克隆的TuMV-NIb、LFY基因的基礎上，構建成反義雙價基因的植物表達載體，利用TuMV-NIb基因的目的是抵抗蕪菁花葉病毒，LFY基因的目的是延遲植物的開花時間。通過遺傳轉化研究，建立了大白菜遺傳轉化系統(tǒng)，為利用TuM V-NIb與LFY雙價基因，抵抗大白菜蕪菁花葉病毒和抑制抽薹奠定基礎，培

3、育抗病毒和耐抽薹春大白菜新種質。并獲得了轉TuMV-NIb、LFY基因的陽性植株。主要研究結果如下： 1.近幾年來，TuMV不同株系的核苷酸序列得到測定。病毒復制相關蛋白基因轉入煙草發(fā)現(xiàn)，對TuMV有極強的抗性。LFY基因處于成花相關基因調控網(wǎng)絡的關鍵位置，屬于開花決定基因。通過基因工程手段控制花發(fā)育或開花時間基因的表達，可改變受體植物的花期，直接控制作物生育期。利用克隆的TuMV-NIb、LFY基因，通過酶切、連接、轉化，重組

4、質粒的PCR擴增、酶切鑒定，構建成雙價反義基因的植物表達載體；采用凍融法轉化農(nóng)桿菌LBA4404，獲得了工程菌株。 2.研究了基因型、激素配比等影響大白菜再生的限制因素，確定了以“青3福山”大白菜帶柄子葉為外植體的分化培養(yǎng)基為：MS+6-BA2mg/L+NAA0.5mg/L+TDZ0.1mg/L+AgNO34mg/L；在25℃，16/8hr(光/暗)下培養(yǎng)，不定芽的分化頻率均在85％以上 3.完善了農(nóng)桿菌介導的大白菜葉盤