熊去氧膽酸對AFP-L3及r-GGTmRNA表達的影響.pdf

1、背景和目的:
　　 熊去氧膽酸(UDCA)是臨床上用于利膽、保護細胞、抗氧化、抗凋亡和免疫調(diào)節(jié)等作用的一線肝病藥物。目前國內(nèi)外研究顯示UDCA對結(jié)腸癌的發(fā)生有抑制作用，并能誘導(dǎo)肝癌細胞株及乳腺癌細胞系等多種腫瘤細胞凋亡，也有研究發(fā)現(xiàn)其能抑制致癌物對實驗動物的致癌作用。本文通過建立大鼠肝癌模型，探討UDCA對AFP-L3（甲胎蛋白異質(zhì)體）、大鼠肝癌組織及血液中γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶mRNA(γ-GGTmRNA)亞型表達的影響，以進一步研

2、究UDCA對肝癌發(fā)生的影響，探討UDCA對肝癌發(fā)生的預(yù)防作用。
　　 研究對象:
　　 Wister大鼠60只，雄性，8周齡，體重(180g±10)g，購于山東大學(xué)動物實驗中心。根據(jù)實驗要求分成實驗組及對照組。
　　 方法:
　　 1、動物肝癌模型的建立:將60只Wister大鼠隨機分成4組，以二乙基亞硝銨(DEN)每周1次腹腔注射（60mg/kg）誘導(dǎo)大鼠肝癌形成。①肝癌組24只;②UDCA組24只（給

3、予含4g/L的UDCA飲用水）;③正常對照組10只;④UDCA對照組10只。
　　 2、從第6周起，每4周各組均處死一批大鼠，稱大鼠體重，取其肝臟稱重，結(jié)節(jié)計數(shù)及計算肝/體重比，并作病理學(xué)以了解肝癌發(fā)展的進展。心臟采血2ml，用ELISA法檢測大鼠血清中AFP-L3的水平。
　　 3、取正常組與肝癌組大鼠的血液及肝組織，分別提取RNA，采用普通PCR檢測γ-GGTmRNA亞型(F、 H、P)的表達情況。
　　 4

4、、采用實時定量PT-PCR檢測大鼠肝組織及血液中γ-GGTmRNA-H亞型在不同組各時間段的表達情況。
　　 結(jié)果:
　　 1、在第10周時實驗組肝表面均出現(xiàn)結(jié)節(jié)，病理結(jié)果顯示:肝硬化伴不典型增生結(jié)節(jié)，假小葉內(nèi)的肝細胞出現(xiàn)異型性，出現(xiàn)早期肝癌的表現(xiàn)。第14周結(jié)節(jié)明顯比第10周增多，病理顯示出典型肝癌表現(xiàn)。肝癌組大鼠的成瘤率為75％(15/20)，UDCA組的為45％(9/20)。UDCA組肝臟結(jié)節(jié)數(shù)量均少于肝癌組大鼠(P

5、＜0.05)，肝重及肝/體重比均低于肝癌組(P＜0.05)。
　　 2、γ-GGTmRNA亞型的分布情況:在大鼠肝組織中只表達F與H亞型，P亞型不表達。H亞型在癌組織的陽性檢出率顯著高于正常肝組織(P=0.001)。F亞型在癌組織中的陽性檢出率均少于正常組織(P=0.021)。僅在肝癌大鼠的血液中檢測出H亞型，其陽性率達46.7％，明顯高于正常組(P=0.022)。
　　 3、AFP-L3在實驗第10周（肝癌早期）即開始

6、明顯升高，與第6周有顯著差異。AFP-L3絕對值在肝癌組及UDCA組中均明顯高于對照組(P＜0.05)。UDCA組AFP-L3水平明顯低于肝癌組(P＜0.05)。
　　 4、γ-GGTmRNA-H亞型在第10周（肝癌早期）出現(xiàn)高表達，與第6周有明顯差異(P＜0.05)。肝癌組與UDCA組中肝組織H亞型的表達量與對照組有顯著差異(P＜0.05)。在血液及肝組織中，UDCA組中H亞型的表達均比肝癌組表達量減少(P＜0.05)。