版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文AFP-L3核酸適配子的篩選鑒定及其對肝細胞癌診斷價值的初步研究姓名:方念申請學(xué)位級別:博士專業(yè):內(nèi)科學(xué)(消化系?。┲笇?dǎo)教師:張焜和20080601摘要和力較理想的適配子分別與肝細胞癌患者、慢性病毒性肝炎患者及正常人血清結(jié)合孵育,過濾并收集濾液,以濾液為模板進行實時熒光定量P C R 檢測,作R O C曲線,初步評估適配子對肝癌的診斷價值。結(jié)果:( 1 ) 寡核苷酸文庫和引物序列:單鏈隨機寡核苷酸( s s D
2、 N A ) 文庫的序列為:5 ' - A C CG A C C G T G C T G G A C T C T ( N 4 0 ) A G T A T G A G C G A G C G TT G c G .3 7 ,上游引物序列:5 ' - A C CG A C C G T G C T G G A C T C T - 3 ’,下游引物序N - 5 ' - C G C A A C G C T C G C T C
3、 A T A C T - 3 ’。( 2 ) 文庫P C R 擴增的優(yōu)化條件:最佳退火溫度6 8 ℃,并采用兩溫法擴增;不對稱P C R 的最佳引物比例是2 0 :l ,熱循環(huán)次數(shù)為2 0 :以6 8 ℃的退火溫度進行實時熒光定量P C R ,能準(zhǔn)確而穩(wěn)定地定量文庫模板量。( 3 ) A F P .L 3 蛋白的適配子篩選:經(jīng)過1 3 輪S E L E X 篩選,適配子文庫得到明顯富集,結(jié)合率由起始的5 .1 %升高至4 8 .2 %。
4、( 4 ) 適配子分離和測序:應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng).單鏈構(gòu)象多態(tài)性( P C R .S S C P ) 分析技術(shù)成功分離到7 種適配子,克隆測序證實各適配子的固定區(qū)序列與設(shè)計的序列相同,而隨機區(qū)序列各不相同,模擬分析的二級結(jié)構(gòu)也各不相同,分子構(gòu)象主要有口袋型和發(fā)卡型兩種。( 5 ) 適配子特性鑒定:各適配子與A F P .L 3 結(jié)合均有較強的特異性,其中S 4 和S 7 最強;適配子S 4 和S 7 與A F P .L 3 結(jié)合的解離常
5、數(shù)分別是6 5 0 n m o l /L 和1 3 2 n m o l /L ,有較高的親和力。( 6 ) 適配子對肝癌診斷價值的初步研究:適配子S 7 與肝細胞癌患者的血清結(jié)合率為0 .5 4 1 4 - 0 .1 1 6 ,與慢性肝炎患者的血清結(jié)合率為0 .3 8 2 + 0 .1 0 2 ,與正常人血清的結(jié)合率為0 .4 1 2 - - 1 = 0 .1 2 0 ,以0 .4 7 9為臨界值,R O C 曲線下面積為0 .8 3
6、9 ,診斷肝癌的敏感性為7 5 .O %,特異性8 3 .3 %,準(zhǔn)確率為8 0 .6 %,陽性預(yù)測值為6 9 .2 %,陰性預(yù)測值為8 3 .3 %。結(jié)論:本研究通過自行設(shè)計隨機s s D N A 文庫及相應(yīng)的引物,在優(yōu)化文庫的P C R 擴增條件后進行A F P .L 3 蛋白的適配子篩選,并以P C R .S S C P 技術(shù)分離單一適配子,引入實時熒光定量P C R 技術(shù)鑒定適配子的特性及其對肝癌的診斷價值,獲得滿意的實驗結(jié)果,
7、得出以下結(jié)論: ( 1 ) 建立起較傳統(tǒng)方法更為簡便易行的適配子篩選技術(shù),并篩選出7 個A F P .L 3 核酸適配子: ( 2 ) 核苷酸測序顯示各適配子的兩端固定區(qū)序列與設(shè)計的寡核苷酸序列相符,隨機區(qū)各不相同,計算機模擬分析的二級結(jié)構(gòu)也各不相同; ( 3 ) 各適配子與A F P —L 3 蛋白結(jié)合均有較好的特異性,但各適配子之間強弱不等,以S 4 和S 7 最強; ( 4 ) 特異性較強的適配子S 4 和S 7 與A F P .
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 肝癌血清核酸適配子的篩選及其鑒定.pdf
- 肝細胞癌CT征象與AFP-L3%相關(guān)性研究.pdf
- 肝細胞癌血清腫瘤標(biāo)志物DCP,AFP-L3和AFP的檢測及臨床意義.pdf
- 甲胎蛋白異質(zhì)體(AFP-L3)在原發(fā)性肝細胞癌診斷中的臨床意義.pdf
- Glypican-3適配子對肝癌診斷價值的研究.pdf
- 適配子聯(lián)合分析對肝癌診斷價值的研究.pdf
- 胃癌血清適配子對胃癌診斷價值的研究.pdf
- 血清GP73聯(lián)合AFP檢測對肝細胞癌早期診斷的應(yīng)用價值.pdf
- Cε3-Cε4蛋白核酸適配子篩選及功能研究.pdf
- 泡沫細胞靶標(biāo)蛋白的適配子篩選.pdf
- U87-EGFRvⅢ細胞適配子的篩選及其介導(dǎo)siRNA轉(zhuǎn)運的初步應(yīng)用.pdf
- SELEX技術(shù)篩選泡沫細胞適配子.pdf
- DWI三指數(shù)模型對肝細胞癌分級診斷價值的初步研究.pdf
- 單核細胞增生性李斯特菌適配子的篩選及其初步應(yīng)用.pdf
- 膽管細胞癌與肝細胞癌的MR診斷價值.pdf
- 血清midkine單獨和聯(lián)合AFP檢測對肝細胞癌早期診斷的意義.pdf
- 體外篩選炭疽桿菌芽孢適配子的研究與初步應(yīng)用.pdf
- 血清Dkk-1對肝細胞癌的診斷價值.pdf
- 重組人FcγRI核酸適配子的體外篩選及其在膿毒血癥實驗診斷中的應(yīng)用研究.pdf
- 熊去氧膽酸對AFP-L3及r-GGTmRNA表達的影響.pdf
評論
0/150
提交評論