人胰腺導管腺癌細胞PL45的核酸適配體篩選及其靶標鑒定.pdf

1、胰腺癌是一種惡性程度很高，診斷和治療都很困難的消化腺惡性腫瘤，是目前最嚴重的癌癥之一，病理類型包括導管腺癌、腺泡細胞癌、小腺體癌、大嗜酸性顆粒細胞性癌等，其中胰腺導管腺癌是胰腺癌中最常見的一種，占胰腺癌發(fā)病率的95％，往往晚期時才被發(fā)現(xiàn)。目前胰腺癌最有效的治療手段是手術(shù)切除，但是5年生存率仍不足6％，因此發(fā)現(xiàn)新的檢測胰腺癌特異性的分子探針，尋找新的腫瘤標志物，對于胰腺癌的防治具有重要的作用。
　　為了獲得特異性識別胰腺導管腺癌的核

2、酸適配體，我們合成了ssDNA文庫，以人胰腺導管腺癌細胞系PL45為靶標細胞，以人永生化胰腺導管上皮細胞系hTERT-HPNE為對照細胞，進行cell-SELEX篩選。通過15輪篩選，發(fā)現(xiàn)ssDNA庫達到最大富集。利用高通量測序技術(shù)，根據(jù)序列的同質(zhì)性，分成了六個家族，挑選了每個家族的第一條用于進一步的鑒定，發(fā)現(xiàn)XQ-2能特異性結(jié)合人胰腺導管腺癌細胞系PL45，而不結(jié)合對照細胞系hTERT-HPNE，結(jié)合人胰腺導管腺癌細胞系PL45的解離

3、常數(shù)約為82.5nM。
　　通過逐漸刪減兩端固定序列的方式對篩選出的核酸適配體XQ-2的序列進行分析優(yōu)化，流式細胞術(shù)結(jié)果表明經(jīng)過刪減后的核酸適配體XQ-2d與靶細胞PL45的結(jié)合能力更強。為了提高核酸適配體在復雜環(huán)境中的穩(wěn)定性，對刪減后的核酸適配體XQ-2d進行了化學修飾，發(fā)現(xiàn)經(jīng)甲氧基修飾的刪減后的核酸適配體，不僅保持了與靶細胞高效的結(jié)合能力，還可以明顯提高其穩(wěn)定性，這有利于其在生物醫(yī)學中的應(yīng)用。
　　為了考察核酸適配體在復

4、雜生物環(huán)境下的識別性能，本文表征了核酸適配體與臨床病理石蠟組織切片以及小鼠活體腫瘤的結(jié)合情況，切片結(jié)果表明核酸適配體對癌組織的識別效率高達82.5％，遠遠高于對正常組織的識別。在小鼠活體腫瘤實驗中，尾靜脈注射5分鐘后，在腫瘤位置開始富集，60分鐘后富集達到最強，180分鐘后腫瘤位置仍有信號，表明核酸適配體在復雜環(huán)境中仍能保持良好的識別能力，并且保持高度的組織特異性。
　　目前胰腺導管腺癌的腫瘤標志物較少，無特異性，且用途不廣，十分