?；切苋パ跄懰釋?duì)大鼠急性脊髓損傷神經(jīng)細(xì)胞自噬的影響及對(duì)其保護(hù)作用.pdf

1、目的：探討?；切苋パ跄懰釋?duì)改良 Allen’s重物打擊法構(gòu)建大鼠急性脊髓損傷模型神經(jīng)細(xì)胞自噬的影響。
　　方法：選取6-8周雄性 SD大鼠，體重250-300g共計(jì)72只。隨機(jī)分為三組：假手術(shù)組、手術(shù)組對(duì)照組（生理鹽水組）、?；切苋パ跄懰?TUDCA)組（分高低劑量?jī)蓚€(gè)亞組）。分別于脊髓損傷后24小時(shí)、5天、10天處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。參照 Basso Beattie Bresnahan(BBB)運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分,對(duì)各組大鼠損傷后和猝死前作后

2、肢運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分，比較對(duì)照組與TUDCA組大鼠在運(yùn)動(dòng)功能方面的差異性；采用電子顯微鏡，觀察神經(jīng)細(xì)胞中自噬現(xiàn)象的發(fā)生發(fā)展及TUDCA干預(yù)后受損脊髓神經(jīng)細(xì)胞的生物學(xué)特性；HE染色對(duì)比脊髓組織形態(tài)在光鏡下的差異；采用 Western blotting方法，檢測(cè)自噬相關(guān)因子（Beclin-1）在各組的表達(dá)情況；檢測(cè)凋亡相關(guān)因子caspass-3在各組的表達(dá)情況；并采用 RT-PCR方法分別檢測(cè)上述蛋白的mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果： BBB運(yùn)動(dòng)

3、功能評(píng)分中假手術(shù)組大鼠的活動(dòng)不受限。對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組比較，對(duì)照組的BBB評(píng)分值明顯低于實(shí)驗(yàn)組，反映到大鼠的活動(dòng)上則可見(jiàn)活動(dòng)性略差于實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組中高低藥物劑量對(duì)大鼠活動(dòng)的影響無(wú)明顯差異，即生理鹽水組的運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分明顯減弱。
　　采用電子顯微鏡，觀察神經(jīng)細(xì)胞中自噬現(xiàn)象的發(fā)生發(fā)展及TUDCA干預(yù)后受損脊髓神經(jīng)細(xì)胞的生物學(xué)特性；HE染色對(duì)比脊髓組織形態(tài)在光鏡下的差異。正常脊髓形態(tài)組織，脊髓神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞完整，未見(jiàn)明顯壞死細(xì)胞。對(duì)照組損傷

4、處的脊髓組織，可以見(jiàn)到細(xì)胞呈空泡狀變性，其間大片的出血、水腫,細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)疏松明顯，灰質(zhì)組織被破壞，伴有大量神經(jīng)元細(xì)胞壞死,而存活的神經(jīng)元細(xì)胞中，部分可見(jiàn)核固縮損傷處的脊髓組織。TUDCA處理的實(shí)驗(yàn)組組，與對(duì)照組相比標(biāo)本上同樣以出血、水腫和壞死為主要表現(xiàn)，但對(duì)照組最大的特點(diǎn)表現(xiàn)在，損傷中心附近的節(jié)段，同樣出現(xiàn)損傷,可以看到損傷范圍擴(kuò)大，與其相鄰的神經(jīng)細(xì)胞破壞明顯,部分細(xì)胞形態(tài)有了較明顯的改變，實(shí)驗(yàn)組中，雖然細(xì)胞損傷的范圍較之前同樣有所擴(kuò)

5、大，但是和對(duì)照組相比，波及的范圍明顯較小，并且相鄰神經(jīng)細(xì)胞的破壞程度較輕。
　　采用 Western blotting方法，檢測(cè)自噬相關(guān)因子（Beclin-1）在各組的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)組Beclin-1的表達(dá)均高于對(duì)照組，并且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，同樣TUDCA的給藥劑量的高低之間比較無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　采用 Western blotting方法，檢測(cè)凋亡相關(guān)因子（caspass-3）在各組的表達(dá)情況。SCI早期對(duì)照組大鼠各時(shí)間點(diǎn)