蒙藥熊膽、熊去氧膽酸及膽酸對(duì)免疫性血小板減少性紫癜的治療作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、免疫性血小板減少性紫癜(immune thrombocytopenic purpura，ITP)是臨床常見的自身免疫性出血性疾病之一。ITP病因及發(fā)病機(jī)制尚未明確，因此雖然現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療 ITP的方法很多，但療效不盡理想，且復(fù)發(fā)率多。熊膽是蒙醫(yī)臨床常用且主要的止血藥物之一，以該藥作為主要組分進(jìn)行配伍的制劑治療ITP療效高且安全性、可靠性強(qiáng)。
　　目的：
　　首次客觀評(píng)價(jià)蒙藥熊膽、熊去氧膽酸及膽酸對(duì)ITP的治療作用，并初步探討相

2、關(guān)作用機(jī)制，為蒙藥熊膽、熊去氧膽酸及膽酸治療ITP提供科學(xué)依據(jù)，更為研發(fā)和利用蒙藥熊膽及其有效替代品提供線索。
　　方法：
　　利用阿糖胞苷誘發(fā)血小板減少性模型即血小板生成減少模型：將90只昆明小鼠隨機(jī)分為正常組，模型組，潑尼松組，蒙藥熊膽（低、高）劑量組，熊去氧膽酸（低、高）劑量組和膽酸（低、高）劑量組，從造模第1d開始，各組相應(yīng)進(jìn)行灌胃治療，治療10d后，通過對(duì)比觀察各組小鼠外周血象，骨髓巨核細(xì)胞的數(shù)量等指標(biāo)，評(píng)價(jià)蒙藥熊

3、膽、熊去氧膽酸及膽酸促進(jìn)血小板生成的作用。
　　采用注射豚鼠抗小鼠血小板血清（APS）方法復(fù)制ITP模型即血小板免疫性破壞模型：將90只BALB／C小鼠隨機(jī)分為正常組，模型組，潑尼松組，蒙藥熊膽（低、高）劑量組，熊去氧膽酸（低、高）劑量組和膽酸（低、高）劑量組，從造模第6d開始，各組進(jìn)行相應(yīng)治療，治療10d后，通過對(duì)比觀察各組小鼠一般情況，外周血象，骨髓巨核細(xì)胞數(shù)量及分類，相關(guān)免疫器官組織病理形態(tài)學(xué)等指標(biāo)，評(píng)價(jià)蒙藥熊膽、熊去氧膽酸

4、及膽酸減少血小板免疫性破壞及對(duì)ITP的治療作用。在確定藥效后，在此模型的基礎(chǔ)上，以熊膽和熊去氧膽酸高劑量為研究對(duì)象，分別采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組小鼠血小板膜糖蛋白CD41、CD61，T細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+；ELISA法測(cè)定各組血小板相關(guān)抗體（PAIgG）、血清細(xì)胞因子白介素-4、干擾素-γ（IL-4、IFN-γ）等，以探討蒙藥熊膽及熊去氧膽酸治療ITP的可能機(jī)制及途徑。
　　結(jié)果：
　　1.阿糖胞苷誘發(fā)血小板減

5、少性模型結(jié)果顯示，造模后，模型組外周PLT計(jì)數(shù)及骨髓巨核細(xì)胞數(shù)量均減少，與同期正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。治療后，除膽酸低劑量組外，其余各治療組血小板計(jì)數(shù)升高，與同期模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中蒙藥熊膽高劑量組和熊去氧膽酸高劑量組尤為顯著，與潑尼松組及正常組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2.APS免疫法建立ITP模型結(jié)果顯示，造模后，模型組小鼠出現(xiàn)皮膚紫癜，PLT計(jì)數(shù)急劇下降，巨核

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)增加，而產(chǎn)板型巨核細(xì)胞數(shù)降低，脾臟臟器指數(shù)增大，脾臟組織病理形態(tài)學(xué)異常，與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。治療后，除膽酸低劑量組外，其余各治療組一般情況改善，PLT計(jì)數(shù)顯著回升，巨核細(xì)胞計(jì)數(shù)降低，而產(chǎn)板型巨核細(xì)胞數(shù)顯著升高，脾臟臟器指數(shù)降低，脾臟組織病理學(xué)改善，與同期模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中潑尼松組，蒙藥熊膽高劑量組和熊去氧膽酸高劑量組尤為明顯，三組間無差異（P＞0.05）。
　　3.機(jī)

7、制研究結(jié)果顯示，模型組血小板膜糖蛋白CD41、CD61陽性表達(dá)率減少、陽性熒光強(qiáng)度下降，PAIgG含量明顯升高，CD3+、CD4+、CD8+百分比及CD4+/CD8+百分比值減少，血清IL-4表達(dá)水平降低、IFN-γ表達(dá)水平升高，IFN-γ/IL-4的比值升高，與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。治療后，潑尼松組、蒙藥熊膽高劑量組、熊去氧膽酸高劑量組血小板膜糖蛋白CD41、CD61陽性表達(dá)率升高、陽性熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，PAIgG表

8、達(dá)水平降低，CD3+、CD4+、CD8+百分比及CD4+/CD8+百分比值上升，血清IL-4表達(dá)水平升高、IFN-γ表達(dá)水平下降，IFN-γ/IL-4的比值降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中潑尼松組，蒙藥熊膽高劑量組和熊去氧膽酸高劑量組尤為明顯，三組間無差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.蒙藥熊膽、熊去氧膽酸及膽酸均能恢復(fù)ITP小鼠的血小板計(jì)數(shù)，增加血小板的生成，抑制骨髓巨核細(xì)胞的異常增生，促進(jìn)