肌醇六磷酸通過(guò)PI3K-Akt信號(hào)通路對(duì)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞生長(zhǎng)的影響.pdf

1、目的：通過(guò)研究PI3K/Akt信號(hào)通路在肌醇六磷酸(inositol hexaphosphate,IP6)抑制結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞生長(zhǎng)中的作用，探討IP6誘導(dǎo)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞凋亡的機(jī)制。
　　方法：1.體外培養(yǎng)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞，使用不同濃度的IP6（0μg/mL，50μg/mL，100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL）進(jìn)行干預(yù)，并依此濃度分組，干預(yù)24 h和48h。
　　2. MTT法檢測(cè)不同濃度的IP

2、6（0μg/mL，50μg/mL，100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL）對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞分別干預(yù)24h和48h生長(zhǎng)抑制作用效果。
　　3.應(yīng)用流式細(xì)胞儀技術(shù)，采用AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測(cè)不同濃度IP6組對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞干預(yù)48h后的細(xì)胞凋亡率。
　　4. Western-blot檢測(cè)PI3K、pAkt、Akt和caspase-9蛋白的表達(dá)情況。
　　5.Real-time PCR檢測(cè)PI3K、

3、Akt、caspase-9、mTOR和NF-κ B mRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1.隨IP6干預(yù)濃度的增加和時(shí)間的延長(zhǎng)，IP6對(duì)HT-29細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用逐漸增強(qiáng)且有顯著的時(shí)間-劑量依賴性。
　　2.HT-29細(xì)胞經(jīng)IP6作用48h后,隨著IP6濃度的增加，HT-29細(xì)胞的凋亡增加，且IP6主要誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞發(fā)生早期凋亡。
　　3.在IP6干預(yù)48h后，隨著IP6干預(yù)濃度的增加，PI3K,Akt及pAkt的表

4、達(dá)逐漸降低，并呈濃度依賴性（P＜0.05）,隨著IP6濃度的增加，caspase-9表達(dá)逐漸增加，呈濃度依賴性（P＜0.05）。
　　4.在IP6干預(yù)48h后，隨著IP6干預(yù)濃度的增加，PI3K、Akt和mTOR的mRNA的表達(dá)逐漸降低，而NF-κ B及caspase-9的mRNA表達(dá)逐漸增加（P＜0.05）。
　　結(jié)論：1.IP6能夠抑制HT-29結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖，并呈濃度依賴性。
　　2.IP6能夠誘導(dǎo)HT-29結(jié)