基于Akt-mTOR信號(hào)通路的葉黃素對(duì)結(jié)腸癌HT29細(xì)胞增殖抑制作用的研究.pdf

1、目的：結(jié)腸癌是一種常見的消化道惡性腫瘤，在胃腸道腫瘤中排名第二位。目前全世界每年新增結(jié)腸癌患者超過(guò)百萬(wàn)人，結(jié)腸癌發(fā)病率高，其死亡率在腫瘤中排名第三位。近年來(lái)，隨著我國(guó)人民生活習(xí)慣的改變，結(jié)腸癌在我國(guó)的發(fā)病率正在迅速提高，其上升速度為每年4.1％，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)2%的國(guó)際水平，已嚴(yán)重威脅病人的生命。結(jié)腸癌的發(fā)生是一個(gè)多因素共同作用的結(jié)果，并且發(fā)病隱匿、迅速，患者生存周期較短。目前對(duì)結(jié)腸癌的治療手段主要是切除、化療和放療，治療手段單一，且效果并不

2、理想，病人術(shù)后易復(fù)發(fā)。因此，尋找一種新型、高效、低毒的天然植物藥物對(duì)于結(jié)腸癌的防治具有重要意義。
　　葉黃素主要存在于瓜果蔬菜中，是一種類胡蘿卜素。葉黃素具有預(yù)防白內(nèi)障，保護(hù)視力以及抗氧化的功能。同時(shí)，其在延緩動(dòng)脈硬化以及抗腫瘤方面也存在著重要的作用。本實(shí)驗(yàn)室前期實(shí)驗(yàn)已證實(shí)：葉黃素在達(dá)到一定濃度之后，可顯著抑制胃癌、肝癌及食管癌細(xì)胞的增殖。本研究旨在探討葉黃素對(duì)人結(jié)腸癌HT29細(xì)胞的增殖抑制作用及其可能的作用機(jī)制。
　　方法

3、：采用SRB法繪制人結(jié)腸癌HT29細(xì)胞8 d的生長(zhǎng)曲線；在HT29細(xì)胞培養(yǎng)液中加入不同濃度的葉黃素，分別于培養(yǎng)24、48、72 h后，采用SRB法檢測(cè)葉黃素對(duì)人結(jié)腸癌 HT29細(xì)胞增殖情況的影響；采用倒置顯微鏡觀察葉黃素對(duì)HT29細(xì)胞形態(tài)的影響；采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)葉黃素對(duì)HT29細(xì)胞周期的影響；用不同濃度的葉黃素處理HT29細(xì)胞48 h后，采用Western blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)AKT和 mTOR蛋白的磷酸化水平、eIF4E表達(dá)水平的變化

4、；采用 RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞eIF4E mRNA表達(dá)的情況。
　　結(jié)果：SRB法檢測(cè)結(jié)果顯示，葉黃素能明顯抑制人結(jié)腸癌HT29細(xì)胞的增殖，并具有時(shí)間依賴性和劑量依賴性。濃度為40 mg/L的葉黃素作用HT29細(xì)胞24h、48 h和72 h后，其抑制率分別為12.04%，19.10%和33.50%。將葉黃素濃度增加到160 mg/L后，其抑制率分別提高到28.90%，61.76%和84.84%。流式細(xì)胞儀檢測(cè)HT29細(xì)胞周期結(jié)果顯示

5、，葉黃素作用HT29細(xì)胞48 h后，HT29細(xì)胞周期發(fā)生明顯阻滯，G0/G1期細(xì)胞比例大幅上升。Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，葉黃素作用HT29細(xì)胞48 h后，ATK蛋白的磷酸化水平降低，mTOR蛋白的磷酸化水平亦降低，eIF4E的表達(dá)水平下調(diào)，且均具有劑量依賴性。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明，葉黃素作用HT29細(xì)胞48 h后，細(xì)胞內(nèi)eIF4E mRNA的表達(dá)下調(diào)，說(shuō)明葉黃素可能影響eIF4E基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。
　　結(jié)論：葉黃