肌醇六磷酸的幾種次級(jí)磷酸化形式對(duì)HT-29細(xì)胞體外生長的抑制作用.pdf

1、目的：比較肌醇六磷酸（IP6）的不同次級(jí)磷酸化形式對(duì)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞體外生長的影響，并初步探究其作用的相關(guān)機(jī)制。
　　方法：1．應(yīng)用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度IP3、IP1、IP6作用48h后，對(duì)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞生長的抑制率，并分別計(jì)算半數(shù)抑制濃度（the half maximal inhibitory concentration，IC50）；
　　2．流式細(xì)胞術(shù)法檢測(cè)不同濃度IP3和IP6對(duì)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞凋亡的

2、發(fā)生率和細(xì)胞周期的影響；
　　3．免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)不同濃度IP3和IP6對(duì)HT-29細(xì)胞內(nèi)PCNA、Bcl-2、Bax表達(dá)的影響；
　　4．實(shí)時(shí)定量PCR（Real–time PCR,RT-PCR）檢測(cè)不同濃度IP3和IP6對(duì)細(xì)胞癌基因P53、Bcl-2、Bax mRNA表達(dá)的影響；
　　5．Western blot檢測(cè) IP3和IP6作用HT-29細(xì)胞后，癌基因P53表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：1. IP3、IP

3、1、IP6均具有抑制HT-29細(xì)胞增殖的作用，且IP3、IP1的作用效果均優(yōu)于IP6（P<0.05），尤以IP3的抑制作用最強(qiáng)（P<0.05）。IP3、IP1、IP6作用48h對(duì)HT-29細(xì)胞的IC50值分別為2.3mmol/L、3.3mmol/L、3.5mmol/L。
　　2．IP3和IP6均可使HT-29細(xì)胞細(xì)胞周期發(fā)生G1期阻滯，且隨著IP3和IP6干預(yù)劑量的增加，HT-29細(xì)胞停留在 G1期的細(xì)胞增加，同空白對(duì)照組相比，差

4、別具有顯著性（P<0.05），其中以IP3的阻滯作用更強(qiáng)。與對(duì)照組相比，IP3和IP6各劑量組HT-29細(xì)胞凋亡率均有升高，并且隨著IP3和IP6干預(yù)劑量增加，細(xì)胞凋亡率逐漸升高，與IP6相比，IP3作用組細(xì)胞凋亡率更高（P<0.05）。
　　3．與對(duì)照組相比，不同濃度的IP3和IP6對(duì)PCNA的表達(dá)均有明顯抑制作用，可抑制Bcl-2蛋白的表達(dá)，并促進(jìn)Bax蛋白的表達(dá)（P<0.05）。且在相同劑量下，IP3的作用較IP6更為明顯（

5、P<0.05）。
　　4．隨著IP3和IP6作用劑量的增加，HT-29細(xì)胞P53、Bcl-2 mRNA的表達(dá)均降低，Bax mRNA的表達(dá)增加，差別具有顯著性（P<0.05）。且在相同劑量下，IP3的作用效果優(yōu)于IP6。
　　5．與對(duì)照組相比，IP3和IP6組HT-29細(xì)胞P53蛋白表達(dá)均降低，差別具有顯著性（P<0.05）。其中以IP3組下調(diào)P53蛋白的作用更明顯（P<0.05）。
　　結(jié)論： IP6的次級(jí)磷酸化形式