microRNA-374a靶向CCND1失活PI3K-AKT通路抑制結(jié)腸癌的發(fā)展.pdf

1、結(jié)腸癌是常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率呈逐年升高的趨勢(shì)，目前對(duì)結(jié)腸癌具體發(fā)病機(jī)制仍有很多尚待明確的地方。
　　microRNA-374a(miR-374a)在不同腫瘤中發(fā)揮不同的作用，如在乳腺癌中miR-374a可促進(jìn)EMT的發(fā)生，在胃癌中促進(jìn)細(xì)胞增殖，在鼻咽癌中卻可抑制細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移，增加細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性，而miR-374a在結(jié)腸癌中的作用有待我們?nèi)パ芯俊?br>　　目的:
　　1.體內(nèi)外功能實(shí)驗(yàn)研究miR-374a在結(jié)腸

2、癌中的作用;
　　2.探究miR-374a在結(jié)腸癌中發(fā)揮作用的機(jī)制;
　　3.找到miR-374a在結(jié)腸癌中作用的靶基因及miR-374a如何通過靶基因調(diào)控相關(guān)通路;
　　4.分析miR-374a和靶基因在結(jié)腸癌組織中表達(dá)的相關(guān)性及對(duì)預(yù)后的影響。
　　方法:
　　1.體內(nèi)外功能實(shí)驗(yàn)研究miR-374a在結(jié)腸癌中的作用
　　(1)在HCT116和SW620中構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)miR-374a的細(xì)胞株;

3、>　　(2)體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-374a對(duì)細(xì)胞增殖、侵襲和遷移的影響;
　　(3)裸鼠皮下成瘤和肝包膜轉(zhuǎn)移模型驗(yàn)證miR-374a對(duì)細(xì)胞增殖和肝內(nèi)轉(zhuǎn)移能力的作用，并用免疫組化檢測(cè)肝內(nèi)腫瘤的EMT相關(guān)因子;
　　(4)轉(zhuǎn)染miR-374a inhibitors進(jìn)行功能回復(fù)實(shí)驗(yàn)。
　　2.探究miR-374a在結(jié)腸癌中發(fā)揮作用的機(jī)制:Western Blot檢測(cè)增殖和EMT相關(guān)蛋白表達(dá)改變并找到相關(guān)通路。
　　3.找

4、到miR-374a在結(jié)腸癌中作用的靶基因及miR-374a如何通過靶基因調(diào)控相關(guān)通路
　　(1)生物學(xué)軟件預(yù)測(cè)miR-374a的靶基因并進(jìn)行雙熒光素酶報(bào)告驗(yàn)證;
　　(2) Western Blot檢測(cè)干擾靶基因后周期、EMT蛋白表達(dá)及相關(guān)通路的改變，功能實(shí)驗(yàn)檢測(cè)干擾靶基因?qū)?xì)胞功能的影響。
　　(3) Western Blot檢測(cè)重新表達(dá)靶基因后周期、EMT蛋白表達(dá)及相關(guān)通路的改變，功能實(shí)驗(yàn)檢測(cè)重新表達(dá)靶基因?qū)?xì)胞功

5、能的影響。
　　4.分析miR-374a和靶基因在結(jié)腸癌組織中表達(dá)的相關(guān)性及對(duì)預(yù)后的影響
　　(1)免疫組化觀察miR-374a和靶基因在結(jié)腸癌組織表達(dá)定位和表達(dá)量差異;
　　(2)結(jié)合miR-374a和靶基因的表達(dá)分析兩者相關(guān)性及對(duì)預(yù)后的影響。
　　結(jié)果:
　　1.miR-374a在體內(nèi)外均抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、侵襲、遷移和肝內(nèi)轉(zhuǎn)移能力;
　　2.miR-374a抑制PI3K/AKT通路及下游周期、E