羅格列酮抑制青光眼濾過術(shù)術(shù)區(qū)纖維化的研究.pdf

1、研究目的： 青光眼是以病理性高眼壓、進(jìn)行性視神經(jīng)變性和視野缺損為特征的，位列全球第二位的不可逆性致盲眼病。我國(guó)乃至世界范圍用于青光眼治療的費(fèi)用以及由此造成的直接經(jīng)濟(jì)損失與增加的社會(huì)負(fù)擔(dān)是巨大的。因此青光眼的防治研究是眼科學(xué)研究的重要領(lǐng)域，是防盲工作及公共衛(wèi)生工作的重點(diǎn)之一，同時(shí)具有非常重要的社會(huì)、經(jīng)濟(jì)意義。 濾過性手術(shù)仍是目前藥物無法控制的青光眼的主要治療手段，但術(shù)后二年內(nèi)的失敗率達(dá)15％～25％，手術(shù)失敗的最直接原因就

2、是術(shù)后濾過區(qū)的組織通過啟動(dòng)自身修復(fù)功能，成纖維細(xì)胞增殖，導(dǎo)致濾過區(qū)纖維瘢痕化。結(jié)膜下以及鞏膜濾過道瘢痕化是影響術(shù)后遠(yuǎn)期眼壓穩(wěn)定的重要因素。隨著一些抗代謝藥物，如5-Fu、MMC等的應(yīng)用，抗青光眼濾過手術(shù)的成功率已大大提高，但隨之帶來一些不可避免的并發(fā)癥：濾過泡滲漏、低眼壓、眼球感染、低壓性眼病等等，嚴(yán)重影響了濾過性手術(shù)的效果，并進(jìn)一步加重視功能損害。正確評(píng)價(jià)及應(yīng)用濾過術(shù)后抗瘢痕形成輔助藥物，尋找吸收完全、療效高、毒副作用小、同時(shí)又不影響

3、創(chuàng)口愈合的平衡調(diào)控的抗瘢痕形成藥物，是提高青光眼濾過術(shù)成功率的關(guān)鍵一環(huán)。 羅格列酮是噻唑烷二酮類胰島素增敏劑，是II型糖尿病的首選用藥。新近的動(dòng)物研究發(fā)現(xiàn)：羅格列酮能夠抑制大鼠腎臟和肝臟的間質(zhì)纖維化，其高效的抗纖維化效應(yīng)以及安全性已經(jīng)在動(dòng)物試驗(yàn)中得到驗(yàn)證。這些試驗(yàn)表明，羅格列酮能夠減少TGFβ1的表達(dá)、阻止TFGFβ信號(hào)傳導(dǎo)、抑制TGFβ1下游效應(yīng)因子結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)和纖溶酶原激活劑抑制劑-1(PAI-1)的表達(dá)，增

4、加抗纖維化抗炎作用的骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP-7蛋白)表達(dá)等，從而從多層面達(dá)到抗纖維化的作用。 基于這些考慮，本課題研究應(yīng)用羅格列酮抑制人眼Tenon’s囊成纖維細(xì)胞(humansTenon’scapsulefibroblasts，HTF)的增殖和移行的效果，探討其可能的作用機(jī)制，并進(jìn)一步在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型上研究羅格列酮抑制抗青光眼術(shù)后濾過泡的疤痕化、提高青光眼濾過手術(shù)的成功率的可行性、有效性。 方法： 1、人眼球筋膜

5、囊成纖維細(xì)胞的體外培養(yǎng)和鑒定：取新鮮的Tenon’s囊組織，利用組織塊培養(yǎng)法，進(jìn)行成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)，并利用光鏡、細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色法鑒定人成纖維細(xì)胞； 2、在體外進(jìn)行成纖維細(xì)胞原代及傳代培養(yǎng)，分別采用MTT法及劃線法，對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞分別加入10，20，50，100，250，300，400，500mg/L的羅格列酮，研究不同濃度的羅格列酮對(duì)體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞增殖及移行的影響，并采用ELISA方法檢測(cè)不同濃度的羅格列酮對(duì)細(xì)胞TGF

6、—β1的分泌量的影響，采用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)，研究不同濃度的羅格列酮對(duì)TGF—β1mRNA表達(dá)的影響。 3、利用新西蘭純種兔制作青光眼濾過性手術(shù)模型，在手術(shù)后在術(shù)區(qū)旁邊注射羅格列酮，另眼設(shè)為空白對(duì)照。觀察濾過泡的存活情況，并于術(shù)后14d、28d時(shí)取標(biāo)本進(jìn)行術(shù)區(qū)組織病理學(xué)切片，做HE染色，檢測(cè)術(shù)后各組的膠原纖維增殖和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)的情況。 結(jié)果： 1、體外成功培養(yǎng)人眼球筋膜囊成纖維細(xì)胞，細(xì)胞呈長(zhǎng)

7、梭形，胞漿豐富，核大，生長(zhǎng)能力強(qiáng)，呈旋渦樣或羽毛樣生長(zhǎng)，Vimentin染色陽性、角蛋白染色陰性； 2、MTT法結(jié)果顯示：當(dāng)濃度在20～500mg/L之間變化時(shí)，羅格列酮能明顯抑制成纖維細(xì)胞的增殖和移行，與對(duì)照組比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且強(qiáng)度呈劑量依賴性； 3、ELISA法檢測(cè)表明：羅格列酮能明顯下調(diào)TGF-β1的分泌，與對(duì)照組比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義； 4、RT-PCR檢測(cè)結(jié)果示：羅格列酮能明顯下調(diào)TGF-β1m

8、RNA的表達(dá)，與對(duì)照組比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義； 5、在新西蘭純種兔濾過性手術(shù)模型中，單純手術(shù)組的濾過泡存活不到2周，而羅格列酮抑制組的濾過泡可以維持近4周；病理組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)單純手術(shù)組術(shù)后可見結(jié)膜下組織有較多的炎癥細(xì)胞和成纖維細(xì)胞增殖，傷口愈合較快；而羅格列酮抑制組在術(shù)后結(jié)膜下組織中炎癥細(xì)胞和成纖維細(xì)胞增生較少，明顯比單純手術(shù)組稀疏，鞏膜傷口愈合較差，時(shí)間較長(zhǎng)。 結(jié)論： 羅格列酮能明顯抑制人Tenon’s囊成纖維