漢防已甲素調(diào)控青光眼術(shù)區(qū)纖維化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、青光眼濾過手術(shù)是青光眼治療的主要手段之一，但由于術(shù)后濾過區(qū)的纖維瘢痕化可致10-30％的手術(shù)失敗率，在難治性青光眼則高達(dá)49-89％。而濾過術(shù)后濾過泡瘢痕形成的病因復(fù)雜，發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，治療手段不盡人意，已成為當(dāng)前青光眼研究的九大難題之一。傳統(tǒng)的中藥具有作用廣泛，副作用少等優(yōu)點(diǎn)，因此，有針對性的開發(fā)新藥、新劑型來防治青光眼術(shù)后濾過區(qū)纖維化，有望為解決這一難題帶來契機(jī)，而由防已科植物提取的生物堿-漢防己甲素已廣泛應(yīng)用于治療全身疾病，

2、其中抗矽肺纖維化等作用，無疑為我們進(jìn)一步研究和應(yīng)用其防治青光眼濾過手術(shù)區(qū)瘢痕形成提供了有益啟示，目前己有報(bào)道Tet可抑制體外培養(yǎng)的兔結(jié)膜成纖維細(xì)胞的生長，但尚缺乏對人眼成纖維細(xì)胞及相關(guān)在體實(shí)驗(yàn)的研究，為此，本研究分以下四部分首次探討中藥單體漢防己甲素抗濾過術(shù)區(qū)纖維化的可行性、安全性、有效性及作用機(jī)制。 第一部分漢防己甲素抑制人眼Tenon囊成纖維細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究 目的：觀察漢防己甲素(Tet)對體外培養(yǎng)的人眼Tenon

3、囊成纖維細(xì)胞(Tenon'scapsulefibroblasts，TCFS)生長的抑制作用，探討其可能的作用機(jī)制。 方法：1)MTT法測定不同濃度的Tet對TCFS的抑制作用；2)電鏡觀察TCFS細(xì)胞形態(tài)的改變；3)流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期及凋亡；4)末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)dUTP缺口末段標(biāo)記法(terminaldeoxynucleotidyltransferasemediateddUTPnickendlabeling，TUNE

4、L)檢測細(xì)胞凋亡；5)鏈酶親和素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物技術(shù)(streptavidin-biotinperoxidosecomplextechnique，SABC)和適時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(realtime-polymerasechainreaction，RT-PCR)檢測細(xì)胞中bax、bcl-2和轉(zhuǎn)化生長因子-β2(transforminggrowthfactor-beta2，TGFβ2)蛋白和mRNA表達(dá)改變。 結(jié)論：Te

5、t抑制TCFS細(xì)胞的生長，呈劑量依賴性，并可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。 第二部分漢防己甲素滴眼液的制劑研究 目的：研究漢防己甲素滴眼液的處方及制備工藝，建立其含量測定方法。 方法：1)以特定的制備方法將主藥溶解于鹽酸溶液中，通過考察制劑在室溫、光照、高溫條件下的穩(wěn)定性確定處方。2)用高效液相法測定制劑的含量，并進(jìn)行方法學(xué)研究。 結(jié)論：漢防己甲素滴眼液質(zhì)量穩(wěn)定、可靠，各方面指標(biāo)達(dá)到設(shè)計(jì)要求。 第三部分漢防己甲素滴

6、眼液抗兔眼濾過術(shù)區(qū)纖維化的實(shí)驗(yàn)研究 目的：觀察漢防己甲素滴眼液抑制兔眼濾過術(shù)區(qū)纖維化的療效。 方法：采用兔眼全層鞏膜切除濾過術(shù)動物模型。實(shí)驗(yàn)動物共20只，隨機(jī)分為單純手術(shù)組、0.2g/L絲裂霉素C組、0.1％Tet組、賦形劑組。用Tono-Pen眼壓計(jì)、裂隙燈、光鏡、電鏡、免疫組織化學(xué)方法分別檢測眼壓、濾過泡形態(tài)改變、兔眼濾過區(qū)病理改變及TGFβ2受體蛋白表達(dá)。 結(jié)論：漢防己甲素滴眼液能提高兔眼濾過手術(shù)的成功率，可

7、作為抑制濾過泡瘢痕形成的輔助藥物之一。 第四部分漢防己甲素滴眼液對眼組織毒副作用的實(shí)驗(yàn)研究 目的：觀察漢防己甲素滴眼液對兔眼的刺激反應(yīng)及長期滴眼的毒性作用。 方法：1)20只家兔(40眼)隨機(jī)分為0.1％Tet、0.2％Tet、0.5％Tet、1％Tet、賦形劑五組，每只家兔右眼分別滴上述各組滴眼液0.1ml，左眼滴等體積的生理鹽水做對照，每天4次，連續(xù)1周，觀察藥物對眼的刺激性。2)25只家兔(50眼)隨機(jī)分為