版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領
文檔簡介
1、目的:
本課題旨在應用RNA干擾技術(shù),以IKKβ為靶點設計合成siRNA,由納米微載體CS-g-(PEI-b-mPEG)介導,在恒河猴動物模型觀察其對濾過術(shù)后疤痕化的調(diào)控作用和安全性。
方法:
設計并合成靶向恒河猴IKKβ的siRNA三對,以100nM的相同濃度在納米微載體CS-g-(PEI-b-mPEG)介導下轉(zhuǎn)染猴Tenon's囊成纖維細胞,RT-PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后IKKβ的mRNA表達水
2、平,篩選出具有較高RNA干擾效率的siRNA。
將篩選出的siRNA以不同濃度(5nM,10nM,25nM,50nM,100nM)轉(zhuǎn)染猴Tenon's囊成纖維細胞,使用real time RT-PCR檢測干擾后IKKβ的mRNA的表達水平,Western blot法檢測干擾后IKKβ的蛋白表達水平,同時MTT法檢測不同濃度對成纖維細胞增殖能力的影響。細胞劃痕法觀察對成纖維細胞遷移能力的影響。
制作恒河猴濾過手
3、術(shù)模型,并隨機分為3組:siRNA組(6只)、MMC組(4只)以及PBS組(4只)。其中siRNA組分別于術(shù)畢即刻和術(shù)后7天,濾過區(qū)球結(jié)膜下注射0.1ml的CS-g-(PEI-b-mPEG)/IKKβ-siRNA(溶解于無RNA酶水,濃度50nM),MMC組(0.2mg/ml)和PBS組分別為陽性對照和空白對照。術(shù)后觀察時間點為:3d、7d、10d、14d、17d、21d、24d、28d、31d、35d、42d、49d、56d及60d,
4、行常規(guī)裂隙燈檢查、濾過泡評估以及眼壓測量;術(shù)后60d,每組分別取2眼,術(shù)區(qū)HE染色進行組織病理學檢查。
結(jié)果
經(jīng)篩選出最高效的IKKβ-siRNA以濃度5nM、10nM、25nM、50 nM、100 nM轉(zhuǎn)染猴Tenon's囊成纖維細胞后,猴Tenon's囊成纖維細胞中IKKβ的mRNA表達水平隨著siRNA轉(zhuǎn)染濃度的增加而逐漸降低,與空白對照組相比,各濃度組差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。蛋白表達量也
5、隨著siRNA轉(zhuǎn)染濃度的增加而逐漸降低。與空白對照組相比較,各濃度組對成纖維細胞增殖的抑制率差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),50nM的濃度處理組對成纖維細胞增殖的抑制已達到平臺期。細胞劃痕法檢測示細胞遷移能力受到抑制。
在恒河猴濾過手術(shù)模型中,siRNA組結(jié)膜下注射CS-g-(PEI-b-mPEG)/IKKβ-siRNA具有良好的眼內(nèi)相容性,與MMC組以及PBS組相比,未發(fā)生明顯毒副作用。與PBS組相比,siRNA組
6、的濾過泡生存時間明顯延長,PBS組、siRNA組及MMC組濾過泡生存時間的中位數(shù)分別為29.5天、45.5天和60天。siRNA組和MMC組濾過泡面積明顯大于PBS組,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01),而siRNA組和MMC組之間的差異沒有統(tǒng)計學意義(P=0.214)。siRNA組的濾過泡高度明顯大于PBS組(P<0.01),而MMC組的濾過泡高度最大(P<0.01)。PBS組在術(shù)后31日以后,眼壓和術(shù)前相比無統(tǒng)計學差異,siRNA組
7、在術(shù)后42日眼壓和術(shù)前相比具有顯著性差異,MMC組在術(shù)后各觀察點的眼壓和術(shù)前相比均具有顯著性差異。組織學檢查顯示較PBS組,siRNA組能明顯抑制濾過區(qū)結(jié)膜下纖維化,抑制結(jié)膜下膠原纖維的形成,但沒有顯示MMC組的彌漫性結(jié)膜上皮變薄等過度抑制現(xiàn)象。
結(jié)論:
以納米微載體CS-g-(PEI-b-mPEG)介導,靶向IKKβ小干擾RNA可以有效抑制恒河猴術(shù)后濾過區(qū)的疤痕化,具有良好的生物相容性,并且不會導致MMC類
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 納米微載體介導小干擾RNA調(diào)控人Tenon’s囊成纖維細胞增殖的研究.pdf
- 小干擾RNA和藥物輸送納米載體的研究.pdf
- RNA干擾技術(shù)調(diào)控青光眼術(shù)區(qū)纖維化的研究.pdf
- 載體介導的腫瘤細胞RNA干擾.pdf
- 基于脂蛋白納米載體的小干擾RNA遞送方法研究.pdf
- 小干擾RNA納米遞送載體及其腫瘤治療應用研究.pdf
- 基于脂蛋白納米載體的小干擾rna靶向遞送方法研究
- 納米載體輸送小干擾RNA克服系統(tǒng)給藥屏障.pdf
- 腺病毒載體介導的RNA干擾體外抑制HBV復制的研究.pdf
- 納米基因載體介導RNA干擾沉默Survivin基因治療大腸癌的實驗研究.pdf
- TSG101小干擾RNA載體的構(gòu)建及鑒定.pdf
- 應用小干擾RNA抑制人瘢痕疙瘩Smad基因表達的實驗研究.pdf
- cdh1小干擾rna載體的構(gòu)建及鑒定
- TARBP2的類泛素化修飾調(diào)控小RNA干擾效率的機制.pdf
- 載體介導RNA干擾沉默大鼠NgR基因?qū)顾钃p傷的修復作用.pdf
- 農(nóng)桿菌介導的ACO基因RNA干擾表達載體轉(zhuǎn)化百合的研究.pdf
- 載體介導的RNA干擾技術(shù)對非小細胞肺癌A549細胞的增殖抑制作用.pdf
- 基因槍介導的psilencercjun載體對大鼠結(jié)腸組織的rna干擾效應
- 肝癌細胞中RhoA小干擾RNA載體的構(gòu)建與鑒定.pdf
- 靶向TGFβ1的shRNA干擾載體介導人增生性瘢痕基因治療的實驗研究.pdf
評論
0/150
提交評論