農(nóng)桿菌介導(dǎo)PeACC基因利用RNA干擾載體對(duì)東方百合遺傳轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、百合花姿雅致，花色鮮艷，芳香濃郁，是盆栽、切花和點(diǎn)綴庭院的名貴花卉。全世界切花百合年銷量數(shù)以億計(jì)，我國(guó)近幾年的需求量也急劇上升。然而無論是作盆栽、切花還是園林中應(yīng)用，百合的花期短，給人們的觀賞都帶來了美中不足的感覺，如何延長(zhǎng)百合花朵的壽命已成為近20年來科學(xué)研究的主要課題之一。由于常規(guī)雜交育種的局限性和化學(xué)保鮮劑使用的毒副作用，目前許多專家都把目光投向轉(zhuǎn)基因植物育種應(yīng)用上。 本研究是以東方百合“索邦”(Sorbonne)的無菌苗

2、為材料，將從牡丹中克隆到的PeACC(ACC氧化酶)基因片段采用RNA干擾(dsRNA-mediatedgenesilencing)技術(shù)構(gòu)建成的載體，利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法導(dǎo)入百合外植體，通過PCR檢測(cè)后獲得陽性表達(dá)的植株。研究取得的主要結(jié)果是： 1.獲得了東方百合“索邦”鱗片離體再生體系，其中鱗片分化最佳培養(yǎng)基為：MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1 2.建立了比較穩(wěn)定高效離體基因轉(zhuǎn)化的直接分化受體

3、系統(tǒng)(1)誘導(dǎo)小葉柄分化率最高的激素組合為MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.3mg·L-1；誘導(dǎo)鱗片葉分化率最高的激素組合為MS+6-BA1.0mg·L-1+2,4-D0.3mg·L-1；(2)轉(zhuǎn)化植株生根培養(yǎng)基激素組合為：MS+NAA0.5mg·L-1；(3)篩選百合轉(zhuǎn)基因植株的卡那霉素最佳濃度：小葉柄作轉(zhuǎn)基因受體材料時(shí)，卡那霉素以80mg·L-1為宜；鱗片葉作為轉(zhuǎn)基因的受體材料時(shí)，卡那霉素以120mg·L-1為宜；(4)篩

4、選了羧芐青霉素抑菌的最佳濃度：東方百合“索邦”組培苗的小葉柄和鱗片葉作為農(nóng)桿菌介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)化受體材料時(shí)，抑菌所用羧芐青霉素的濃度應(yīng)以300mg·L-1為宜。 3.影響百合農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化因素的研究，結(jié)果表明：(1)通過不同菌液濃度對(duì)轉(zhuǎn)化的影響試驗(yàn)得出，菌液濃度在OD600為0.8左右時(shí)浸染效果最好；(2)乙酰丁香酮能明顯提高百合轉(zhuǎn)化植株的再生頻率，轉(zhuǎn)化前重懸菌體時(shí)加入100umol·L-1AS活化2～3小時(shí)，可以提高農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化