青光眼濾過泡臨床分析及核心蛋白聚糖對(duì)瘢痕化調(diào)控作用的研究.pdf

1、第一章功能性濾過泡形態(tài)與眼壓的相關(guān)性分析 目的：建立一種使用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)獲取小梁切除術(shù)后功能性濾過泡相對(duì)面積的方法，探討功能性濾過泡的大小與眼壓的量化關(guān)系。 方法：采用裂隙燈照相系統(tǒng)對(duì)小梁切除術(shù)后的功能性濾過泡進(jìn)行圖像采集；利用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)(EPC02000軟件)對(duì)濾過泡的相對(duì)面積(Relativeblebsize，RBS)進(jìn)行定量分析和一致性分析；用Goldmann眼壓計(jì)測(cè)量眼壓；將功能性濾過泡相對(duì)面積與眼

2、壓進(jìn)行線性相關(guān)及回歸分析；比較此種計(jì)算功能性濾過泡相對(duì)面積的方法與IBAGS(theIndiariaBlebAppearanceGradingScale)濾過泡評(píng)估方法在分析與眼壓相關(guān)性時(shí)的差異。 結(jié)果：入選的青光眼患者35例(42眼)行小梁切除術(shù)后的平均隨訪時(shí)間為2.4±2.7(0.5～11.0)年，平均眼壓為13.2±3.6(5.0～19.7)mmHg。用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)測(cè)量RBS平均值為0.45±0.27(0.10～1.

3、44)。一致性分析結(jié)果表明測(cè)量者內(nèi)的類內(nèi)相關(guān)系數(shù)(ICC)為0.984(P<0.01)；測(cè)量者間的ICC值為0.971(P<0.01)。RBS與眼壓值的相關(guān)系數(shù)為r=-0.732(P<0.01)，兩者的回歸方程為：YIOP=17.363-9.451XRBS，決定系數(shù)R2=0.523。IBAGS各項(xiàng)指標(biāo)的評(píng)分，濾過泡的范圍(E)為1.8±0.5(0～3)分；隆起的高度(H)為1.9±0.7(1～3)分；血管化的程度(V)為1.0±0.4(

4、0～2)分，將E、H、V與眼壓關(guān)系進(jìn)行多元回歸(stepwise)分析，H進(jìn)入回歸方程，得方程YIOP=17.911-2.564XH，R2=0.267；將H、V、RBS與眼壓進(jìn)行多元回歸分析，RBS進(jìn)入回歸方程，得方程YIOP=17.363-9.451XRBS，R2=0.523。 結(jié)論：計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)(EPCO2000軟件)可較準(zhǔn)確地測(cè)量小梁切除術(shù)后功能性濾過泡的相對(duì)面積；此法較傳統(tǒng)評(píng)估方法能夠更準(zhǔn)確地反映濾過泡的形態(tài)與眼壓

5、的定量關(guān)系；功能性濾過泡越大，眼壓越低。 第二章瘢痕性濾過泡的臨床病理分析 目的：分析因?yàn)V過道瘢痕瘢痕導(dǎo)致濾過手術(shù)失敗的濾過泡病理組織學(xué)特征。 方法：收集8例瘢痕性濾過泡的結(jié)膜及結(jié)膜下瘢痕組織進(jìn)行常規(guī)病理檢查。對(duì)結(jié)膜鱗狀上皮化生的程度、上皮細(xì)胞的層數(shù)、上皮下新生血管的數(shù)量、成纖維細(xì)胞的數(shù)量、炎癥細(xì)胞的數(shù)量、膠原的沉積等病理特征進(jìn)行量化分析。采用SPSS13.0軟件對(duì)量化的病理特征進(jìn)行多變量Spearman相關(guān)分析

6、。 結(jié)果：8例青光眼患者中，男性4例，女性4例，年齡42.9±19.2(20.0～74.0)歲，本次手術(shù)距末次手術(shù)時(shí)間21.9±12.5(10～42)月。瘢痕性濾過泡組織中有多種不同的病理變化，其中結(jié)膜上皮細(xì)胞以變性為主，發(fā)生率為80.0％(4/5)；局限性的結(jié)膜上皮顯著增生，占60.0％(3/5)；上皮下顯著的膠原過度沉積、變性，占37.5％(3/8)；結(jié)膜下組織部分伴有明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、成纖維細(xì)胞增殖和血管組織形成，其發(fā)生

7、率則分別為37.5％(3/8)、37.5％(3/8)和50.0％(4/8)。結(jié)膜上皮細(xì)胞層數(shù)(ET)與炎癥細(xì)胞的數(shù)量(IC)相關(guān)系數(shù)，r為-0.914(P<0.05)，成纖維細(xì)胞的數(shù)量(FC)與膠原沉積的程度(CD)的相關(guān)系數(shù)r為0.932(P<0.01)，：其它各指標(biāo)之間的相關(guān)性不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論：結(jié)膜上皮細(xì)胞變性、膠原的沉積、炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)、成纖維細(xì)胞的增殖和血管組織的增生是瘢痕性濾過泡病理改變的共有特征，但不同個(gè)體之

8、間又存在著以某些特征為主要表現(xiàn)的差異。 第三章核心蛋白聚糖對(duì)人眼結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用及可能機(jī)制 目的：探討核心蛋白聚糖(Decorin,DCN)對(duì)體外培養(yǎng)的人眼結(jié)膜囊成纖維細(xì)胞(HumanTenon'sFibroblasts，HTFs)生長(zhǎng)的抑制作用及可能作用機(jī)制。 方法：采用組織塊法體外培養(yǎng)HTFs，并進(jìn)行免疫組化鑒定。形態(tài)學(xué)觀察和MMT法檢測(cè)DCN和絲裂霉素C(MMC)對(duì)體外培養(yǎng)的正常人HTFs生長(zhǎng)

9、抑制作用的差異；流式細(xì)胞儀檢測(cè)DCN對(duì)HTFs細(xì)胞周期的影響和誘導(dǎo)凋亡的作用；半定量RT-PCR法檢測(cè)DCN對(duì)。TGF-β2、Smad4、ProcollagenI、MMP-2mRNA表達(dá)的影響；Western-blot法和激光掃描共聚焦顯微鏡檢測(cè)DCN對(duì)TGF-β2蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果：體外成功培養(yǎng)了HTFs；用不同濃度的DCN對(duì)HTFs生長(zhǎng)進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)濃度為0.4μg/ml、2μg/ml、10μg/ml和50μg/ml

10、的DCN對(duì)HTFs生長(zhǎng)具有抑制作用，50μg/ml作用48小時(shí)的抑制作用最強(qiáng)，同樣濃度、同樣作用時(shí)間的MMC對(duì)HTFs的抑制作用明顯強(qiáng)于DCN。0.4μg/ml、50μg/ml濃度的DCN作用HTFs48小時(shí)后，G0/G1期細(xì)胞比例增加，S期細(xì)胞比例減少，未見對(duì)細(xì)胞有誘導(dǎo)凋亡的作用。0.4μg/ml、2μg/ml、10μg/ml和50μg/ml濃度的DCN能夠下調(diào)TGF-β2、Smad4、PrecollagenI、MMP-2等mRNA的

11、表達(dá)。0.4μg/ml、50μg/ml濃度的DCN能夠下調(diào)TGF-β2蛋白的表達(dá)。 結(jié)論：在一定濃度范圍內(nèi)DCN對(duì)HTFs的生長(zhǎng)有抑制作用，該作用具有劑量和時(shí)間依賴性，DCN的抑制作用強(qiáng)度明顯低于同條件下MMC的作用。DCN對(duì)HTFs抑制作用的方式與MMC不同。DCN對(duì)HTFs生長(zhǎng)的有多方面影響；下調(diào)TGF-β2的表達(dá)可能是。DCN抑制HTFs生長(zhǎng)的機(jī)制之一。 第四章核心蛋白聚糖在免眼小梁切除術(shù)后濾過道瘢痕調(diào)控中作用的研

12、究 目的：研究核心蛋白聚糖抑制動(dòng)物濾過手術(shù)模型瘢痕形成的有效性和安全性。 方法：將18只兔子36眼隨機(jī)分入四組：DCN組(小梁切除術(shù)+DCN濾過泡下注射)、MMC組(小梁切除術(shù)+術(shù)中聯(lián)合應(yīng)用MMC)、PBS組(小梁切除術(shù)+PBS濾過泡下注射)和T組(單純小梁切除術(shù))。觀察各組的眼壓、濾過泡形態(tài)、角膜內(nèi)皮、視網(wǎng)膜電圖(ERG)、濾過泡組織學(xué)特征及睫狀體組織的掃描電子顯微鏡觀察。 結(jié)果：在小梁切除術(shù)后7天、14天、2

13、1天和28天時(shí)，DCN組和MMC組的眼壓低于PBS組和T組。DCN組和MMC組濾過泡的存活時(shí)間長(zhǎng)于PBS組和T組；DCN組的濾過泡蒼白，彌散，MMC組濾過泡蒼白，薄壁。濾過泡病理組織顯示，DCN和MMC組的膠原沉積的程度輕于同期的PBS組和T組，28天時(shí)，DCN和MMC可見瘢痕組織形成，但其致密程度低于PBS組和T組，MMC組瘢痕組織最為稀疏。術(shù)后21天時(shí)，各組角膜內(nèi)皮細(xì)胞密度及六邊形細(xì)胞的比例檢測(cè)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。術(shù)后28