重組人核糖核酸酶抑制因子對青光眼濾過術(shù)后瘢痕形成抑制作用的研究.pdf

1、背景介紹：人核糖核酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor．hRI)是核糖核酸酶A(RNase A)的抑制劑，廣泛存在于哺乳動物細胞漿中，它可與中性及堿性RNase A以1：1結(jié)合抑制其活性。血管生成素(angiogenin，Ang)是近來發(fā)現(xiàn)的一種強效的促血管生成因子，在眼部生理和病理性新生血管生成過程中，在大部分環(huán)節(jié)都發(fā)揮著重要作用。由于Ang與RNase A有35﹪的同源性，且立體結(jié)構(gòu)也極其相似，因此

2、二者均可作為配體與RI緊密結(jié)合，且RI與Ang的親和力比與RNaseA的親和力還要大60倍，因此我們推測RI通過與Ang結(jié)合，可以抑制新血管生成，本室已經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)RI可以抑制腫瘤組織周圍的血管形成。 目的：利用基因工程生產(chǎn)的方法，探究在最優(yōu)條件下使融合蛋白GST-hRI可溶性表達；用GST-hRI對小梁切除術(shù)后的兔眼給藥，探究通過hRI抑制傷口肉芽組織中新血管生成，進而抑制病理性瘢痕的形成，建立功能性的濾過通道和濾過泡，從而提高

3、青光眼小梁切除術(shù)的成功率。 方法：通過優(yōu)化誘導(dǎo)劑IPTG的誘導(dǎo)濃度和誘導(dǎo)溫度得到目的融合蛋白GST-hRI的可溶性表達。將多次培養(yǎng)的菌體收集，經(jīng)超聲破碎，收集離心后的上清，采用RNase A Glutathione．Sepharose 4B親和層析柱分離純化目的融合蛋白。對兔眼行小梁切除術(shù)，制備青光眼動物模型。實驗組術(shù)前1天、術(shù)后每天用hRI滴眼，術(shù)后第14天處死動物取手術(shù)區(qū)組織。觀測統(tǒng)計術(shù)后濾過泡的類型，并作組織切片進行HE染

4、色觀察微血管密度，評估該融合蛋白對兔眼小梁切除術(shù)后手術(shù)區(qū)新血管生成和瘢痕形成的抑制作用。 結(jié)果：0.5mmol/L IPTG，16℃誘導(dǎo)表達8～10小時，超聲破碎菌體得到可溶性大量表達的GST-hRI。治療組的手術(shù)區(qū)新生血管數(shù)量少于對照組，瘢痕形成小，功能性濾過泡比例高。 結(jié)論：青光眼濾過術(shù)后用hRI滴眼，hRI通過與Ang結(jié)合可以有效抑制手術(shù)區(qū)肉芽組織中血管新生，進而抑制瘢痕的形成，使功能性濾過泡易形成，保證房水的順暢