重組人核糖核酸酶抑制因子對(duì)大鼠白內(nèi)障的防治作用研究.pdf

1、人核糖核酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor，hRI)是一種酸性蛋白質(zhì)(pI=4.7)，廣泛存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞漿中，分子量約為50kD，其基因定位于染色體11p15.5。RI是核糖核酸酶A(ribonucIease A，RNaseA)的抑制劑，可以有效地抑制其對(duì)RNA的水解活性。RI的三維結(jié)構(gòu)的特征是由交替出現(xiàn)的α螺旋和β片層構(gòu)成的馬蹄形結(jié)構(gòu)。RI的重復(fù)結(jié)構(gòu)單元是富含亮氨酸殘基的序列，這些富含亮氨酸殘基

2、的重復(fù)序列(Leucine-rich repeats，LRRs)出現(xiàn)在一個(gè)大的蛋白家族，該蛋白家族的顯著特征是具有巨大的表面區(qū)域用于蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)問(wèn)的相互作用。RI的這種獨(dú)特結(jié)構(gòu)和功能使其成為研究LRRs的核心蛋白。hRI含有32個(gè)高度保守的半胱氨酸殘基，其中至少有30個(gè)半胱氨酸的巰基以還原形式存在，還原型巰基是保持RI正常生物學(xué)活性所必需的。生物體內(nèi)的還原型谷胱甘肽(GSH)通過(guò)其巰基對(duì)抗氧化劑，提示RI可能具有一定的抗氧化能力。

3、 糖尿病性白內(nèi)障發(fā)病的機(jī)理是由于單糖氧化時(shí)產(chǎn)生大量的氧自由基，氧自由基可損傷晶狀體蛋白和晶狀體上皮細(xì)胞膜，導(dǎo)致蛋白變性和細(xì)胞受損而引起白內(nèi)障的發(fā)生發(fā)展。本研究室的前期研究已表明RI能對(duì)抗H<,2>O<,2>對(duì)大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞的氧化損傷。 本實(shí)驗(yàn)采用腹腔注射鏈脲佐菌素的方法建立了Wistar大鼠糖尿病性白內(nèi)障模型；采用本室構(gòu)建的pGEX-6p-1-hri融合型表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌Rosetta，表達(dá)重組的GST-hRI；

4、經(jīng)培養(yǎng)和收集細(xì)菌、超聲破碎菌體、收集離心后的上清，再經(jīng)Glutathione-Sepharose 4B親和層析分離純化獲得重組hRI。觀察重組hRI對(duì)鏈脲佐菌素糖尿病性大鼠白內(nèi)障的治療作用。結(jié)果表明，重組hRI可明顯減緩大鼠白內(nèi)障的發(fā)展進(jìn)程。通過(guò)檢測(cè)大鼠晶狀體的各種生化指標(biāo)表明，GST-hRI高劑量組GSH含量及SOD活性與正常組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(p>0.05)，明顯高于其它組，其MDA含量則低于其它各治療組，且低于正常組，而其GSH-P

5、X活性與其它各組無(wú)明顯差異(p>0.05)。通過(guò)檢測(cè)各組動(dòng)物房水中GSH含量及SOD的活性，與晶狀體中對(duì)應(yīng)的生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果相一致。推測(cè)GST-hRI能對(duì)抗氧化劑，從而減少了晶狀體內(nèi)的氧化應(yīng)激壓力，避免了晶狀體內(nèi)各種抗氧化酶類(lèi)構(gòu)成的抵御氧化應(yīng)激屏障的啟動(dòng)。 結(jié)論： 1.成功的應(yīng)用鏈脲佐菌素制備了大鼠自內(nèi)障模型。 2.融合蛋白GST-RI能明顯延緩糖尿病性白內(nèi)障的發(fā)生、發(fā)展，對(duì)鏈脲佐菌素性白內(nèi)障有一定的防治作用，且