核糖核酸酶抑制因子的抗體制備與純化及ELISA法對(duì)其藥代動(dòng)力學(xué)的研究.pdf

1、腫瘤是威脅人類(lèi)健康的主要疾病之一.傳統(tǒng)的化療藥物主要從直接殺傷腫瘤細(xì)胞入手,同時(shí)對(duì)正常細(xì)胞亦有毒副作用.核糖核酸酶抑制因子(Ribonuclease Inhibitor,RI)抑制腫瘤的作用則是通過(guò)與血管生成因子(Angiogenin,Ang)緊密結(jié)合,抑制腫瘤血管的生成,阻斷腫瘤細(xì)胞的氧氣及營(yíng)養(yǎng)供應(yīng),從而使腫瘤細(xì)胞停止生長(zhǎng),而對(duì)正常細(xì)胞卻無(wú)毒副作用.該實(shí)驗(yàn)室已報(bào)告RI具有良好的治療多種腫瘤療效;該研究在已有的基礎(chǔ)上成功制備了RI抗體并

2、進(jìn)行純化,應(yīng)用ELISA法對(duì)RI的藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了初步探索.該文對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行篩選優(yōu)化,確定了上樣量為2ml,洗脫液梯度濃度最高為30﹪,經(jīng)吸光度及蛋白含量測(cè)定確定組分收集為9~16管(1ml/管).純化后的抗體IgG進(jìn)行SDS-PAGE,在約550kD處有單一條帶,經(jīng)Western-blot檢測(cè)有特異性條帶出現(xiàn)(約50kD處),說(shuō)明純化效果較好.ELISA法測(cè)其效價(jià),滴度達(dá)64,000以上,活性保持得很好,其穩(wěn)定性可達(dá)12個(gè)月以上.實(shí)

3、驗(yàn)中采用間接ELISA法測(cè)抗原,建立了標(biāo)準(zhǔn)曲線,并對(duì)測(cè)定條件進(jìn)行優(yōu)化,確定了一抗稀釋度為1:4000,二抗稀釋度為1:2000,BSA封閉液濃度為2﹪.同時(shí)對(duì)其方法學(xué)進(jìn)行考證,靈敏度可達(dá)0.05μg/ml,批內(nèi)變異系數(shù)為9.28﹪,批間變異系數(shù)為13.56﹪,一抗稀釋4000倍后,穩(wěn)定性可達(dá)6個(gè)月以上.RI作為抗腫瘤藥物其藥代動(dòng)力學(xué)研究未見(jiàn)報(bào)道,該文對(duì)ELISA法進(jìn)行了初步探討,為以后的測(cè)定方法提供了一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),進(jìn)而為RI的藥代動(dòng)力