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文檔簡介
1、目的:探討羧甲基殼聚糖交聯(lián)京尼平凝膠負載5-氟尿嘧啶(5-Fu)和抗VEGF單克隆抗體(Bevacizumab)的合成方法。評價該凝膠對新西蘭大白兔青光眼濾過手術后濾過區(qū)傷口愈合的調控作用及安全性。 方法:1.利用京尼平與羧甲基殼聚糖進行交聯(lián)反應制備凝膠。載藥凝膠的合成采用原位合成方法,即加入京尼平前在羧甲基殼聚糖溶液里加入5-Fu及Bevacizumab。將羧甲基殼聚糖與京尼平按比例為1:0.1,1:0.6,1:1.2(w/w
2、)凍干凝膠置于pH7.4PBS溶液中,每半小時取出,吸水后稱重,以評價凝膠的溶脹性能。將載藥凝膠置于37℃ pH7.4的PBS溶液中,每時間點取出釋放溶液,用紫外分光光度計測量5-Fu濃度,用考馬斯亮藍法測量Bevacizumab的濃度,計算藥物從凝膠中釋放的累積釋放率。2.制作新西蘭大白兔青光眼濾過手術模型,術后濾過區(qū)旁結膜下注射載5-Fu凝膠或載5-Fu/Bevacizumab凝膠0.3ml作為實驗組,設立單純手術組、絲裂霉素C(M
3、MC)組、多次注射5-Fu組、Bevacizumab組及空白凝膠組作為對照組。術后進行裂隙燈檢查,觀察濾過泡形態(tài)、結膜、角膜、前房炎癥反應、虹膜周切口及晶狀體,裂隙燈下前置鏡觀察視網膜,用非接觸眼壓計測量眼壓,實驗組于術后7,14,21,28天處死動物,對照組于術后7,14,28天處死動物,各組均用錐藍—茜素紅染色法評價角膜內皮活性,進行濾過區(qū)病理切片,HE及Masson染色,觀察術區(qū)組織結構。 結果:1.通過將羧甲基殼聚糖與京
4、尼平交聯(lián)能形成墨綠色凝膠。隨著京尼平加入量的增加,凝膠的溶脹率減少。羧甲基殼聚糖:京尼平分別為1:0.1,10.6,1:1.2(w/w)時,溶脹率分別約為17,12,7。載藥凝膠中5-Fu的體外釋放在4-5小時達到平衡,累積釋放率達約100%,Bevacizumab的體外釋放約在8小時達到平衡,累積釋放率達約15%。2.載5-Fu/Bevacizumab凝膠組能維持術后低眼壓至少于術后28天,與MMC組、多次注射5-Fu組相當,較單純手
5、術組、Bevacizumab組、空白凝膠組的時間明顯延長,載藥凝膠組較單純手術組在術后能維持較高的濾過泡。各組術后早期均有不同程度眼瞼、球結膜水腫、充血,凝膠組較其他組稍明顯,于4-6天內消退;凝膠組3眼(11.54%)出現(xiàn)明顯角膜水腫,于術后1周完全消失;各組前房炎癥反應及出血均于術后1周內消失;各組未發(fā)現(xiàn)術后晶狀體混濁及視網膜脫離。組織分析載藥凝膠較對照組能減少濾過區(qū)組織疤痕形成,凝膠周圍組織沒有明顯炎癥細胞浸潤,動物體內凝膠體積逐
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