可見光誘導體外培養(yǎng)兔視網膜色素上皮細胞凋亡的實驗研究.pdf

1、目的:研究可見光對體外培養(yǎng)的兔視網膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)細胞凋亡的影響.方法:用兩步酶法消化分離、培養(yǎng)并鑒定RPE細胞.以白色熒光燈為光源,用3652(±213)lux光照強度照射RPE細胞.細胞分為4個組,分別為無光照組(Ⅰ組)、光照3小時組(Ⅱ組)、6小時組(Ⅲ組)和9小時組(Ⅳ組).每組又分別在光照后3、12、24、72h終止培養(yǎng)進行流式細胞儀AnnexinV-FITC/PI雙染

2、色流式細胞測定檢測.其中各組培養(yǎng)24h細胞進行細胞周期的測定,觀察RPE細胞的增殖狀態(tài)和凋亡情況;Ⅰ組和Ⅲ組光照前和光照后不同培養(yǎng)時刻點取細胞進行Bcl-2mRNA原位雜交檢測,觀察細胞bcl-2基因表達情況.選取部分Ⅲ24細胞進行透射電鏡的觀察.結果:細胞光照后透射電鏡觀察到凋亡小體、核碎裂細胞形態(tài)學變化.光照后3h,bcl-2mRNA原位雜交陽性細胞數無明顯改變;光照后12h,24h,72h陽性細胞逐漸減少(P<0.01).流式細胞

3、儀檢測結果顯示可見光損傷可引起RPE細胞凋亡與壞死.Ⅱ 24細胞凋亡率為(11.45±1.78)％,Ⅲ3細胞凋亡率為(5.80±0.77)％,Ⅲ24細胞凋亡率為(18.49±0.88)％.Ⅱ 12細胞壞死率為(1.12±0.56)％,Ⅱ 72細胞壞死率為(1.46±0.39)％,Ⅳ12細胞壞死率為(5.33±1.05)％.隨著光照時間和光照后培養(yǎng)時間的延長,細胞凋亡率和細胞壞死率亦逐漸升高,比較組間差異有統計學意義(P<0.05).短時

4、間(3h,6h)光照主要引起細胞凋亡,而長時間(9h)光照細胞壞死更明顯.光照后較短培養(yǎng)時間(3h,12h,24h)主要是細胞凋亡,而培養(yǎng)較長時間(72h)壞死顯著增加.隨著光照時間的延長,細胞增殖指數下降,凋亡率增加(P<0.05).結論:一定強度的可見光照射可引起體外RPE的凋亡.可見光損傷可引起細胞凋亡及壞死,其程度隨著光照時間和光照后培養(yǎng)時間的延長而增加.細胞凋亡在一定條件下可轉化為細胞壞死.一定程度的光照可以影響細胞進入其細胞