三氧化二砷對體外培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、論文題I j授予單位代碼學(xué)號或申請?zhí)柮?級鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文作者姓名學(xué)科門類專業(yè)名稱導(dǎo)師姓名、職稱三氧化二砷對體外培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究蘇亞麗『廷 學(xué)H 艮科學(xué)李秋明教授二零零五年五月八日10 4 590 2 l O l0 赫 磷、、鄭州大學(xué)2 0 0 5 年碩士畢業(yè)論文 摘要該疾病的藥物防治一直是眼科研究的主要課題之一，因此如果尋找更好的藥物干預(yù)，抑制R P E 細(xì)胞的過度增生以及誘導(dǎo)其凋亡，對抑制P V R 形成

2、和降低其術(shù)后復(fù)發(fā)率有重要意義。三氧化二砷是中藥砒霜的有效成分，其已被成功應(yīng)用于臨床治療急性早幼粒細(xì)胞性白血病，取得了顯著療效。三氧化二砷作為一種抗腫瘤劑其作用機(jī)制是通過改變細(xì)胞正常染色體結(jié)構(gòu)，抑制細(xì)胞所含巰基酶活性，改變細(xì)胞線粒體通透性，干擾細(xì)胞代謝，可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。近年關(guān)于三氧化= 砷治療實(shí)體瘤的研究報道很多，實(shí)驗(yàn)證明三氧化二砷能誘導(dǎo)多種實(shí)體瘤細(xì)胞株的細(xì)胞凋亡，同時發(fā)現(xiàn)對過度增生的正常細(xì)胞，如血管平滑肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等亦有凋亡

3、誘導(dǎo)作用，展示了廣闊的臨床應(yīng)用前景。但目前國內(nèi)外尚未見到用其防治P V R 的研究報道，本實(shí)驗(yàn)首次觀察了三氧化二砷對體外培養(yǎng)的人R P E 細(xì)胞的增生抑制及凋亡誘導(dǎo)作用，并觀察了不同生長狀態(tài)下的人R P E 細(xì)胞對三氧化二砷的藥物敏感性，為使用該藥物進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)及在臨床眼科局部應(yīng)用該藥物防治P V R 提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。材料和方法：1 ．細(xì)胞培養(yǎng)取意外死亡者死亡后1 2 小時內(nèi)作為角膜移植的供體眼，按常規(guī)方法收獲R P E 細(xì)胞，即沿赤道

4、剪除眼前節(jié)及部分玻璃體，在解剖顯微鏡下剝離視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層，暴露出R P E 層；用D ．H a n k s 液洗滌眼杯2 ～3 次，加入終濃度為0 ．0 2 ％E D T A 和0 ．2 5 ％胰蛋白酶的混合液，置于3 7 ℃孵箱中消化3 0 分鐘～1 小時。取出眼杯，輕輕吹打，收獲R P E 細(xì)胞懸液，加入2 0 ％胎牛血清的D M E M 終止消化；以1 0 0 0 r ／m i n 離心5 分鐘，棄上清液，將細(xì)胞混懸于含2 0

5、％胎牛血清的D M E M中。將細(xì)胞接種于2 5 m i 培養(yǎng)瓶，置飽和濕度、3 7 * ( 2 、5 ％C 0 2 孵箱培養(yǎng)，4 天后換液，待細(xì)胞融合后，按1 ：3 傳代。傳代細(xì)胞用含1 0 ％胎牛血清的D M E M 培養(yǎng)液培養(yǎng)。選擇第3 撕代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。用鼠抗人角蛋白抗體免疫細(xì)胞化學(xué)染色進(jìn)行細(xì)胞鑒定。2 ．實(shí)驗(yàn)藥物選用三氧化二砷注射液( a r s e n i c t r i o x i d e ，A s 2 0 3 ) ：哈爾