嘌呤受體在視網膜色素上皮細胞功能的作用.pdf

1、目的：觀察并了解嘌呤受體在視網膜色素上皮細胞功能的作用。
　　方法：應用FURA/2熒光壽命成像顯微術檢測ARPE-19細胞內的鈣離子濃度。并應用RT-PCR實驗測定BK,SK,IK通道的存在，然后使用內向外式膜片實驗進一步鑒定BK,SK,IK通道的存在及電流密度和開放概率。最后，通過使用一種網格蛋白或小窩蛋白（caveolin-1）為介質的運輸機制，檢測ATP是否通過Gαq減少了細胞表面的Kir4.1豐富度，并采用western

2、 blot蛋白印記分析，來分析小窩蛋白和網格蛋白重鏈。
　　結果：實驗結果表明，ATP的應用能夠通過激活嘌呤受體增加RPE細胞內的鈣離子濃度。增加的細胞內鈣離子濃度能夠打開鈣離子激活鉀離子通道。許多組織中的SK通道是在P2Y受體與SK通道和P2Y受體的嘌呤刺激下激活的。P2Y受體與SK通道激活的偶聯，是通過蛋白質依賴性磷脂酶 C的激活和IP3生產進行的。IP3受體操縱儲備物引起的局部鈣離子釋放看來是SK的主要刺激。在這項研究里，能

3、受體的激活不僅能引起B(yǎng)K通道開放概率的增加，還會引起SK通道開放概率的增加。SK通道的激活導致向外電流，降低細胞膜興奮性。在此我們還得出，通過一種小窩蛋白內吞作用參與的機制，長期在ATP中培育會導致內向整流鉀離子通道的電流密度降低。
　　結論：無論是對鈣離子激活的鉀通道，還是內向整流鉀離子鉀離子通道，ATP都扮演一個很重要的角色。嘌呤激活可以增加SK和BK通道的開放概率，并能通過一種小窩蛋白內吞作用參與的機制降低內向整流鉀離子通道