藍(lán)光誘導(dǎo)大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞復(fù)制衰老動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察不同藍(lán)光光照強(qiáng)度和光照時(shí)間對大鼠視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)細(xì)胞復(fù)制衰老過程中衰老相關(guān)-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)的表達(dá)情況，探討藍(lán)光照射與復(fù)制衰老之間的關(guān)系，建立復(fù)制衰老的動(dòng)物模型，為進(jìn)一步探討RPE細(xì)胞衰老及研究老年性黃斑變性(AMD)等年齡相關(guān)性疾病提供可應(yīng)用的動(dòng)物模型。 方法：1.Wistal大鼠36只，鼠齡12-14周，雌雄不限，均經(jīng)檢眼鏡、裂隙燈檢查后無眼部疾病。將大鼠置于懸有波長為450±10nm的醫(yī)

2、用藍(lán)光燈管的自制光照架中。隨機(jī)分成4組，每組9只，1組為暗環(huán)境組，2組為自然環(huán)境組(光照度為50±10lux)，3組為500lux照射組(光照強(qiáng)度500±100lux)，4組為10001ux光照組(光照強(qiáng)度為1000±200lux)，每組按照照射時(shí)間再分為A(1月組)、B(2月組)、C(3月組)三個(gè)亞組，分別在1、2、3個(gè)月時(shí)行10％水合氯醛腹腔注射麻醉。2.取出眼球，將右眼球行石蠟切片，HE染色，光鏡下觀察RPE細(xì)胞的變化情況。左眼球

3、行冰凍切片，利用SA-β-Gal染色方法觀察RPE細(xì)胞染色陽性情況。連續(xù)冠狀切片后，每只眼球選取2張完整視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)SA-β-Gal染色切片，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野(×200倍)，計(jì)數(shù)每個(gè)視野中陽性細(xì)胞的個(gè)數(shù)。3.運(yùn)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件，對單一光照組或單一時(shí)間點(diǎn)數(shù)據(jù)采用單因素方差分析，對不同光照組不同時(shí)間點(diǎn)數(shù)據(jù)采用兩因素方差分析，并用SNK檢驗(yàn)進(jìn)行各組間兩兩比較，雙側(cè)檢驗(yàn)，P<0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：1.HE染

4、色：1組和2組大鼠視網(wǎng)膜無明顯改變，表現(xiàn)為層次結(jié)構(gòu)整齊分明，光感受器細(xì)胞內(nèi)外節(jié)形態(tài)規(guī)整，內(nèi)外核層細(xì)胞核染色深紫，染色均勻，RPE細(xì)胞核呈淡紫色，扁橢圓形，邊界清晰，染色均勻。3組與1組相比，表現(xiàn)為細(xì)胞結(jié)構(gòu)層次紊亂，視網(wǎng)膜外層組織萎縮變薄，包括視桿視錐細(xì)胞消失，外核層變薄，數(shù)目減少，外叢狀層變薄消失，使得外核層與內(nèi)核層細(xì)胞呈并行排列。RPE細(xì)胞腫脹變圓，染色變淡，但數(shù)量無明顯改變。4組大鼠視網(wǎng)膜與3組相比病理學(xué)改變基本相以，但程度更深，表

5、現(xiàn)更明顯?？梢娨晽U視錐細(xì)胞大部分消失，RPE細(xì)胞腫脹成球形，數(shù)量無明顯改變。2.SA-β-Gal染色不同光照強(qiáng)度和不同光照時(shí)間段，對于大鼠RPE細(xì)胞SA-β-Gal染色的復(fù)制衰老表現(xiàn)不盡相同，經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)方差齊，呈正態(tài)分布。在不同光照強(qiáng)度和不同光照時(shí)間條件下經(jīng)雙因素方差分析，不同光照強(qiáng)度組大鼠RPE細(xì)胞SA-β-Gal染色陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.000)，尚可認(rèn)為各光照強(qiáng)度組大鼠RPE細(xì)胞SA-β-Gal染色陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)

6、不同；不同光照時(shí)間組大鼠RPE細(xì)胞SA-β-Gal染色陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0。000)，尚可認(rèn)為各時(shí)間組大鼠RPE細(xì)胞SA-β-Gal染色陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)不同。進(jìn)一步用SNK法行各組兩兩比較，除1組、2組之間大鼠RPE細(xì)胞SA—β—Gal染色陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外(p=0.154)，其它各組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.000)。在單一光照強(qiáng)度條件下，經(jīng)單因素方差分析，除1組大鼠RPE細(xì)胞SA—β—Gal染色陽性細(xì)

7、胞個(gè)數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外(P=0.897)，其余各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，進(jìn)一步行SNK法檢驗(yàn)，除1組A與B、B與C組之間(P1=0.687，P2=1.000)，2組A與B組之間(p=0.406)大鼠RPE細(xì)胞SA-β-Gal染色陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其余各組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。在單一時(shí)間條件下，經(jīng)單因素方差分析，各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。進(jìn)一步經(jīng)SNK法檢驗(yàn)，除各時(shí)間段*與＃組相比大鼠RPE