缺血性腦卒中治療的實(shí)驗(yàn)和臨床初步研究.pdf

1、第一部分經(jīng)頸動(dòng)脈途徑移植神經(jīng)干細(xì)胞治療缺血性腦卒中的初步實(shí)驗(yàn)研究 第一節(jié)改良線栓法制備大鼠局灶性腦缺血再灌注模型 目的：建立一種簡便可靠、創(chuàng)傷較小的大鼠局灶性腦缺血再灌注模型. 方法：主要參照Zea Longa的線栓法,適當(dāng)加以改進(jìn),制作SD大鼠的右側(cè)大腦中動(dòng)脈閉塞2小時(shí)后再灌注模型,進(jìn)行神經(jīng)功能評估和病理組織學(xué)檢查,以觀察模型的可靠性. 結(jié)果：25例手術(shù)建模的大鼠中,2例(8﹪)于拔栓線時(shí)突發(fā)死亡,迅速

2、開顱取腦發(fā)現(xiàn)顱底腦池內(nèi)有大量血塊,2例于術(shù)后第2天死亡,1例于術(shù)后第7天死亡,總死亡率為20﹪,其余的均成功建成大腦中動(dòng)脈閉塞/再灌注模型,并在隨后的14天觀察過程中神經(jīng)功能狀況逐漸改善;手術(shù)建模中栓線插入長度對大鼠體重呈線性回歸關(guān)系(P=3.86×10<'-9>);病理HE染色可見模型組大鼠的右側(cè)額頂葉和尾殼核區(qū)域腦組織缺血性損傷改變,神經(jīng)元皺縮,呈不規(guī)則形態(tài),胞漿嗜酸性,胞核深染或消失,細(xì)胞間質(zhì)疏松. 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)改良法制備

3、的大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞/再灌注模型簡便易行,創(chuàng)傷較小,穩(wěn)定性較好,是用于研究局灶性腦缺血再灌注較為理想的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型. 第二節(jié)經(jīng)頸動(dòng)脈途徑移植神經(jīng)干細(xì)胞治療缺血性腦卒中的初步實(shí)驗(yàn)研究 目的：研究經(jīng)頸動(dòng)脈途徑移植神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)治療大鼠腦缺血再灌注模型的效果以及移植NSCs在大鼠腦內(nèi)的狀況. 方法：從懷孕14～16天的SD大鼠(其細(xì)胞均為綠色熒光標(biāo)記)的胚胎大腦和脊髓組織中分離、培養(yǎng)NSCs;采用線栓法制作大鼠

4、的大腦中動(dòng)脈閉塞/再灌注(MCAO/R)模型;將大鼠隨機(jī)分為MCAO/R+NSCs移植組(8只)、MCAO/R+培養(yǎng)液(DFNG)注射組(8只)和正常大鼠+NSCs移植組(5只),MCAO/R+NSCs移植組和MCAO/R+DFNG注射組于建模后24小時(shí)經(jīng)同側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈分別注射NSCs和DFNG;對三組大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評估,在手術(shù)建模后14天(移植后13天)處死大鼠進(jìn)行病理組織學(xué)檢查,并采用免疫熒光方法觀察移植的NSCs在大鼠腦內(nèi)存活、分

5、布和分化情況. 結(jié)果：整個(gè)觀察過程中,正常大鼠+NSCs移植組大鼠始終未出現(xiàn)神經(jīng)功能障礙,MCAO/R+NSCs移植組和MCAO/R+DFNG注射組大鼠手術(shù)建模后均出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能障礙,在隨后14天的觀察過程中神經(jīng)功能狀況逐漸改善,在移植早期兩組大鼠的神經(jīng)功能評分無顯著性差異,在移植后期(手術(shù)建模后10天和14天)MCAO/R+NSCs移植組大鼠的神經(jīng)功能狀況要優(yōu)于MCAO/R+DFNG注射組(P值分別為2.40×10<'-5

6、>和1.45×10<'-5>);病理HE染色顯示,MCAO/R+NSCs移植組和MCAO/R+DFNG注射組可見在右側(cè)大腦中動(dòng)脈供應(yīng)的額頂葉和尾殼核區(qū)域腦組織的缺血性損傷改變,而正常大鼠+NSCs移植組的腦組織結(jié)構(gòu)正常;免疫熒光染色發(fā)現(xiàn),MCAO/R+NSCs移植組可見有移植的NSCs存活、分布于缺血損傷的額頂葉和尾殼核區(qū)域,并有部分移植的NSCs開始朝著神經(jīng)元方向分化,個(gè)別移植的NSCs則開始朝著星形膠質(zhì)細(xì)胞方向分化;而正常大鼠+NS

7、Cs移植組和MCAO/R+DFNG注射組的大鼠中均未發(fā)現(xiàn)有這些現(xiàn)象. 結(jié)論：經(jīng)頸動(dòng)脈途徑移植NSCs治療缺血性腦卒中,可見有移植的NSCs存活、分布于缺血損傷區(qū)域,并朝神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞方向分化來進(jìn)行神經(jīng)修復(fù),從而改善神經(jīng)功能障礙. 第二部分血管內(nèi)支架成形術(shù)治療癥狀性主動(dòng)脈弓上顱外動(dòng)脈狹窄 目的：總結(jié)血管內(nèi)支架成形術(shù)治療癥狀性主動(dòng)脈弓上顱外動(dòng)脈狹窄的短期療效和安全性. 方法：從2003年2月至2007年