白細胞介素-10基因5′端側(cè)翼區(qū)單核苷酸多態(tài)性及其單倍型與系統(tǒng)性紅斑狼瘡易感性的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景：系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus, SLE)是一種以多系統(tǒng)和多器官損傷、自身抗體和免疫復(fù)合物沉積等免疫功能異常表現(xiàn)為特征的原發(fā)性自身免疫性疾病。
　　至今,SLE病因和發(fā)病機制尚未闡明。但其有兩個明顯的免疫功能異常：是體液免疫亢進,表現(xiàn)為Th2細胞活化、增殖,產(chǎn)生細胞因子,使B細胞異常激活、自身耐受喪失,直接產(chǎn)生針對自體細胞核抗原的高水平抗體；二是細胞免疫功能缺陷,表現(xiàn)為抗原呈遞細

2、胞和Thl細胞功能障礙。
　　白細胞介素-10(Interleukin-10, IL-10),一個具有免疫抑制和免疫刺激雙重作用的免疫調(diào)節(jié)細胞因子,既可以抑制Thl細胞株功能和細胞因子合成,又可以刺激B細胞異常激活,在機體免疫機制具有著非常重要的意義。研究表明SLE患者高表達的IL-10,在其體液免疫亢進(自身免疫B細胞的過度活化等)與細胞免疫功能缺陷(Thl/Th2的免疫失衡)中發(fā)揮了十分重要的作用。
　　IL-10基因位

3、于1號染色體1q31-1q32區(qū)域,相對分子量4.7x103,其基因5’端側(cè)翼區(qū)轉(zhuǎn)錄起始位上游的3個單核苷酸多態(tài)性位點-1082G/A(rs1800896)、-819C/T(rs1800871)和-592C/A(rs1800872)及其組成的常見單倍型,可以影響IL-10基因表達水平。關(guān)于這些單核苷酸多態(tài)性及其單倍型與SLE易感性的相關(guān)性研究雖多有報道,然而,結(jié)果并不一致,難以定論。
　　本課題采用病例對照研究方法,利用TaqMa

4、n基因型分型技術(shù),研究中國漢族人群IL-10基因5’端側(cè)翼區(qū)單核苷酸多態(tài)性(SNPs:-1082/-819/-592)及其常見單倍型與SLE易感性的關(guān)系；收集關(guān)于IL-10-1082G/A與SLE易感性、以及IL-10基因5’端側(cè)翼區(qū)(SNPs:-1082/-819/-592)單倍型與SLE易感性的相關(guān)性研究文獻,結(jié)合本次對中國漢族人群的研究結(jié)果進行Meta分析,探討它們與SLE易感性的關(guān)系。
　　研究分3部分。
　　第一部

5、分：中國漢族人群IL-10基因-1082G/A、-819C/T和-592C/A及其單倍型與系統(tǒng)性紅斑狼瘡易感性的相關(guān)性研究
　　目的：旨在比較IL-10基因5’端側(cè)翼區(qū)(SNPs:-1082/-819/-592)基因型及其單倍型在SLE病例和對照的分布差異,探討它們與中國漢族人群SLE易感性的關(guān)系。
　　方法：采用病例對照研究,收集來自兩所三甲醫(yī)院住院和門診的SLE病例579例,符合美國風(fēng)濕病學(xué)會1997年修訂的SLE診斷標

6、準；對照632例,為排除SLE和其它自身免疫疾病的健康獻血員。收集研究對象的一般流行病學(xué)資料情況,抽取外周靜脈血并提取DNA,利用ABI7300PCR儀采用TaqMan探針基因分型技術(shù)對IL-10基因5’端側(cè)翼區(qū)單核苷酸多態(tài)性位點(SNPs:-1082/-819/-592)進行基因型分型,并用SHEsis軟件構(gòu)建其常見單倍型,分析比較它們在SLE病例與對照的頻率分布差異。
　　結(jié)果：(1)3個SNPs在病例和對照組的基因型頻率分布

7、均符合哈迪-溫伯格平衡。IL-10-1082G/A:對照組,x2=1.348,P=0.246,病例組,χ2=0.047,P=0.829；IL-10-819C/T：對照組,χ2=0.408,P=0.523,病例組,χ2=2.208,P=-0.137；IL-10-592C/A：對照組,χ2=0.269,P=0.604,病例組,χ2=2.039,P=-0.153。(2)IL-10-1082G/A基因型分型：病例和對照的G/G、G/A、A/A基

8、因型頻率分別為4.66％、33.16%、62.18%和1.11%、15.03%、83.86%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=74.844,P=-5.59×10-17)。病例和對照的G和A等位基因頻率分別21.24%、78.76%和8.62%、91.38%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(OR=2.858,95%CI=2.245-3.640；χ2=76.946,P=-1.769×10-18)。按性別分析分層,男性病例與對照的基因型頻率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.

9、025,Fisher精確檢驗),G、A等位基因頻率差異也有統(tǒng)計學(xué)意義[χ2=7.075,P=-0.008,OR(95%CI)=2.091(1.204-3.633)]；女性病例和對照的基因型頻率差異也具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=65.635,P=-5.591×10-15),G、A等位基因頻率的差異也有統(tǒng)計學(xué)意義[χ2=65.516,P=-5.765×10-6,OR(95%CI)=3.192(2.384-4.273)]。(3)IL-10-819C

10、/T基因型分型：病例和對照的C/C、C/T、T/T基因型頻率分別為8.29%、45.42%、46.29%和11.39%、43.04%、45.57%,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=3.358,P--0.187)。病例和對照的C和T等位基因頻率分別31.00%、69.00%和32.91%、67.09%,差異無統(tǒng)計學(xué)意義[OR(95%CI)=0.916(0.772-1.087)；χ2=1.013,P=-0.314]。按性別分層分析,男性病例和對照的

11、基因型頻率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.644,P=0.036),C、T等位基因頻率差異有統(tǒng)計學(xué)意義[OR(95%CI)=0.550(0.345-0.877)；χ2=6.419,P--0.011]；女性病例和對照的基因型頻率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=2.534,P---0.282),C、T等位基因頻率差異無統(tǒng)計學(xué)意義[OR(95%CI)=1.008(0.829-1.226；0.007,P=0.936]。(4)IL-10-592C/A基因型分

12、型：病例和對照的C/C、C/A、A/A基因型頻率分別為8.29%、45.25%、46.46%和11.23%、43.20%、45.57%,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=3.006,P=0.222)。病例和對照的C和A等位基因頻率分別30.92%、69.08%和32.83%、67.17%,差異無統(tǒng)計學(xué)意義[OR(95%CI)=0.915(0.771-1.086)；χ2=1.022,P=-0.312]。按性別分層分析,男性病例與對照的基因型頻率差異

13、有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.644,P=0.036),C、A等位基因頻率差異也有統(tǒng)計學(xué)意義[OR(95%CI)=0.550(0.345-0.877)；X2=6.419,P=0.011]；女性病例和對照的基因型頻率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=2.067,P=-0.356),C、A等位基因頻率差異也無統(tǒng)計學(xué)意義[OR(95%CI)=1.009(0.830-1.228)；χ2=0.008,P=-0.927]。(5)單倍型：連鎖不平衡分析結(jié)果顯示3個S

14、NPs在中國漢族人群呈現(xiàn)中到高等程度連鎖不平衡,其中ATA(IL-10-1082A-819T-592A)單倍型是中國SLE的保護性單倍型[OR(95%CI)=0.663(0.560-0.785)；χ2=22.936,P=1.700×10-6]。
　　結(jié)論：中國漢族人群IL-10-1082G/A與SLE易感性密切相關(guān),IL-10基因5’端側(cè)翼區(qū)ATA可能是中國漢族人群SLE的保護性單倍型。
　　第二部分：IL-10基因-108

15、2G/A與系統(tǒng)性紅斑狼瘡易感性的相關(guān)性研究—Meta分析
　　目的：IL-10基因5’端側(cè)翼區(qū)-1082G/A與SLE易感性的相關(guān)性研究結(jié)果存在爭議,本部分研究應(yīng)用Meta分析對文獻報道結(jié)果進行綜合定量評價。
　　方法：以"interleukin10"、"interleukin-10"、"IL10"、"IL-10","SLE"、"systemic lupus erythematosus","polymorphism"、"al

16、lele"、"genotype"、"genetic variation"、"genetic variant"作為關(guān)鍵詞,全面檢索PubMed和Web of Science數(shù)據(jù)庫至2012年12月公開發(fā)表的論文,并對相關(guān)文獻的參考文獻進行追蹤檢索,收集關(guān)于IL-10基因5’端側(cè)翼區(qū)-1082G/A與SLE遺傳易感性相關(guān)的病例對照研究。結(jié)合第一部分相關(guān)研究結(jié)果,運用Stata11.2對各研究數(shù)據(jù)進行合并,計算OR值及95%CI。Meta分析

17、中分別用等位基因模型(G vs.A)、隱性模型(G/G vs.G/A+A/A)、顯性模型(G/G+G/Avs.A/A)、純合子模型(G/G vs.A/A),比較病例和對照的差異。Q檢驗評價各研究間是異質(zhì)性是否顯著,異質(zhì)性顯著(P<0.10,I2>500%)采用隨機效應(yīng)模型分析,異質(zhì)性不顯著(P>0.10,I2<50%)則采用固定效應(yīng)模型分析。繪制Begg’s漏斗圖,并根據(jù)Egger線性回歸檢驗結(jié)果定量評價漏斗圖的對稱性和是否存在發(fā)表偏倚

18、。
　　結(jié)果：14個研究(含本次研究)納入分析,共2385例病例與3032例對照；其中5個基于亞洲人群研究,9個基于高加索人群研究。(1)G vs.A：全部研究、亞洲人群、高加索人群合并OR值及其95%CI分別是1.210(0.958-1.530)(P--0.110)、1.407(0.822-2.408)(P=0.213)、1.100(0.976-1.240)(P=0.119),均無統(tǒng)計學(xué)意義。對比組間無明顯發(fā)表偏倚。(2)G/G

19、 vs.G/A+A/A：全部研究、高加索人群合并OR值及95%CI分別是1.279(0.911-1.796)(P=0.155)、1.026(0.835-1.260)(P=0.807),亞洲人群為3.601(1.975-6.569)(P--0.000)。對比組間無明顯發(fā)表偏倚。(3)G/G+G/A vs.A/A：全部研究、高加索人群合并OR及95%CI分別是1.320(1.003-1.736)(P=0.047)、1.222(1.017-1

20、.468)(P--0.032),差異有統(tǒng)計學(xué)意義；亞洲人群為1.412(0.754-2.645)(P=0.281),差異無統(tǒng)計學(xué)意義。亞洲人群、高加索人群分析,無明顯發(fā)表偏倚；對全部研究分析,發(fā)表偏倚顯著(P<0.05)。(4)G/G vs.A/A：全部研究、亞洲人群合并OR值及95%CI分別是1.540(1.056-2.245)(P=0.025)、4.502(2.408-8.416)(P=-0.000),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；高加索人群

21、為1.223(0.959-1.560)(P=0.104),差異無統(tǒng)計學(xué)意義。對比組間無明顯發(fā)表偏倚。
　　結(jié)論：IL-10-1082G/A與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的易感性相關(guān),該結(jié)果尚需在大樣本人群研究中獲得進一步證實。
　　第三部分：IL-10基因(-1082G/A、-819C/T和-592C/A)單倍型與系統(tǒng)性紅斑狼瘡易感性的相關(guān)性研究—Meta分析
　　目的：利用Meta分析對IL-20基因5’端側(cè)翼區(qū)(-1082G/A

22、、-819C/T和-592C/A)單倍型與系統(tǒng)性紅斑狼瘡易感性的關(guān)系進行研究。
　　方法：以"interleukin10"、"interleukin-10"、"IL10"、"IL-10","systemic lupus erythematosus"、"SLE","haplotype"、"haplotypes"作為關(guān)鍵詞,全面檢索PubMed和Web of Science數(shù)據(jù)庫至2012年12月公開發(fā)表的論文,并對相關(guān)文獻的參考文獻

23、進行追蹤檢索,收集關(guān)于IL-10基因5’端側(cè)翼區(qū)單倍型與SLE易感性關(guān)系的病例對照研究。結(jié)合第一部分相關(guān)研究結(jié)果,運用Stata11.2對各研究的數(shù)據(jù)計算合并OR值及95%CI,Q檢驗評價各研究間異質(zhì)性是否顯著,異質(zhì)性顯著采用隨機效應(yīng)模型分析,異質(zhì)性不顯著則采用固定效應(yīng)模型分析；繪制Begg’s漏斗圖,并根據(jù)Egger線性回歸檢驗結(jié)果定量評價漏斗圖的對稱性和是否存在發(fā)表偏倚。
　　結(jié)果：共13個研究(含本次研究)納入分析,共179

24、0例病例與2368例對照；其中5個基于亞洲人群研究,8個基于高加索人群研究。(1)GCC vs.ATA:全部研究、亞洲人群、高加索人群合并OR值及95%CI分別是1.132(0.989-1.295)(P=0.073)、1.209(0.961-1.520)(P=0.105)、1.093(0.925-1.292)(P=0.298),均無統(tǒng)計學(xué)意義。全部研究和亞洲人群存在明顯發(fā)表偏倚(P<0.05),高加索人群無明顯發(fā)表偏倚(P>0.05)。

25、(2)ACC vs.ATA:全部研究、亞洲人群、高加索人群合并OR值及95%CI分別是0.923(0.765-1.114)(P=0.404)、0.939(0.662-1.331)(P=0.722)、0.949(0.792-1.137)(P+0.569),差異無統(tǒng)計學(xué)意義。各組間均無明顯發(fā)表偏倚。(3)GCC vs. ACC:全部研究的OR(95%CI)是1.173(1.026-1.340)(P=0.019),差異有統(tǒng)計學(xué)意義；亞洲人群、