RIP2基因單核苷酸多態(tài)性及血清水平與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究.pdf

1、本文從以下幾個(gè)方面展開(kāi)論述:
　　研究背景:
　　系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)是一種全身性的自身免疫性疾病,其特征主要表現(xiàn)為多種自身抗體形成,免疫復(fù)合物沉積和補(bǔ)體活化,造成多系統(tǒng)和多器官損害。SLE的發(fā)病機(jī)制至今尚不明確,一般認(rèn)為其受遺傳易感性、環(huán)境因素、性激素紊亂和免疫異常等多個(gè)方面影響。
　　天然免疫和獲得性免疫系統(tǒng)紊亂在SLE的免疫發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。SL

2、E的免疫異常與多條免疫信號(hào)通路(NF-κB信號(hào)通路、Toll-like受體信號(hào)通路、JAK∕STAT信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、PI3-AKT信號(hào)通路及Th17信號(hào)通路等)紊亂密切相關(guān),各條通路之間可能相互作用、異常調(diào)節(jié)從而導(dǎo)致機(jī)體免疫調(diào)節(jié)紊亂。
　　本課題組前期采用病例對(duì)照研究的方法,利用Real-time PCR芯片技術(shù)篩選Toll-like受體信號(hào)通路上SLE的差異表達(dá)基因,結(jié)果發(fā)現(xiàn)受體相互作用蛋白2(receptor in

3、teracting protein2,RIP2)在SLE患者外周血白細(xì)胞中的mRNA表達(dá)上調(diào),提示RIP2可能參與了SLE的發(fā)病。
　　RIP2,也稱為RIPK2、RICK或CARDAK,是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中關(guān)鍵的絲氨酸∕蘇氨酸激酶,能參與Toll-like受體和NOD樣受體等介導(dǎo)的天然免疫和獲得性免疫應(yīng)答,誘導(dǎo)產(chǎn)生炎癥細(xì)胞因子。已有研究表明RIP2可能參與了炎癥性腸病、多發(fā)性硬化癥等自身免疫性疾病的發(fā)病,但是迄今為止國(guó)內(nèi)外尚無(wú)關(guān)于R

4、IP2與SLE關(guān)聯(lián)性研究的相關(guān)報(bào)道。
　　基于上述內(nèi)容,本課題擬采用病例對(duì)照研究,利用TaqMan探針技術(shù)、ELISA方法,檢測(cè)SLE患者及正常對(duì)照者RIP2基因單核苷酸多態(tài)性及血清水平,探討其與SLE發(fā)病之間的關(guān)聯(lián)性。本課題的完成將有助于闡明RIP2在SLE發(fā)病中的作用,進(jìn)一步揭示SLE的發(fā)病機(jī)制,并為尋找新的SLE治療靶點(diǎn)提供科學(xué)依據(jù)。
　　研究一RIP2基因多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究
　　目的:
　

5、　比較SLE患者和正常對(duì)照者RIP2基因的2個(gè)SNP位點(diǎn)(rs16900617、rs16900627)的等位基因和基因型頻率的差異,探討RIP2基因單核苷酸多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的關(guān)聯(lián)性。
　　方法:
　　病例來(lái)自安徽省立醫(yī)院和安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科的SLE患者(均符合1997年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)修訂的SLE分類診斷標(biāo)準(zhǔn)),共590例。對(duì)照來(lái)自健康志愿者,共660例。采用自行設(shè)計(jì)的問(wèn)卷,調(diào)查并記錄研究對(duì)象的一般情況和

6、臨床資料,在獲得知情同意后,采集SLE患者及正常對(duì)照者的外周靜脈血。應(yīng)用TaqMan探針及ABI7300 PCR儀檢測(cè)SLE患者和正常對(duì)照者RIP2基因的等位基因和基因型頻率。
　　采用SPSS10.01軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,χ2檢驗(yàn)或確切概率法用于比較兩組間等位基因頻率、基因型頻率的分布差異,Stata7.0軟件用于分析哈迪-溫伯格平衡,應(yīng)用SHEsis軟件進(jìn)行單倍型分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果:
　　(1)r

7、s16900617位點(diǎn)多態(tài)性與SLE的關(guān)聯(lián)性研究SLE患者組AA、AG、GG的基因型頻率分別為86.4％、13.4%和0.2%,對(duì)照組為77.9%、20.3%和1.8%;SLE患者組A和G等位基因頻率為93.1%和6.9%,對(duì)照組則為88.0%和12.0%。兩組基因型頻率的分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(AGvs.AA:OR=0.59,95%CI0.44-0.81,P=0.001;GGvs.AA:OR=0.08,95%CI0.01-0.65,P=

8、0.006;AG+GGvs.AA:OR=0.55,95%CI0.41-0.75,P<0.001),等位基因頻率的分布差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Gvs.A:OR=0.54,95%CI0.41-0.72,P<0.001)。
　　狼瘡腎炎(lupus nephritis,LN)患者的基因型分布狀況為:A和G等位基因頻率為94.0%和6.0%;AA、AG、GG的基因型頻率分別為88.0%、12.0%和0%。非LN患者組中:A和G等位基因頻率為

9、93.2%和6.8%;AA、AG、GG的基因型頻率分別為86.6%、13.2%和0.2%。兩組的基因型頻率的分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(AGvs.AA:OR=0.90,95%CI0.52-1.55,P=0.698;GGvs.AA:OR=1.003,95%CI0.997-1.008,P=1.000;AG+GGvs.AA:OR=0.88,95%CI0.51-1.52,P=0.651),等位基因頻率的分布差異也沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Gvs.A:OR=0.

10、87,95%CI0.52-1.48,P=0.612)。
　　(2)rs16900627位點(diǎn)多態(tài)性與SLE的關(guān)聯(lián)性研究SLE患者的基因型分布狀況為:A和G等位基因頻率為80.7%和19.3%;AA、AG、GG的基因型頻率分別為64.6%、32.2%和3.2%。對(duì)照組中:A和G等位基因頻率為84.2%和15.8%;AA、AG、GG的基因型頻率分別為72.3%、23.9%和3.8%。兩組的基因型頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(AGvs.AA:

11、OR=1.51,95%CI1.17-1.93,P=0.001;AG+GGvs.AA:OR=1.43,95%CI1.13-1.82,P=0.003),等位基因頻率的分布差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Gvs.A:OR=1.28,95%CI1.04-1.58,P=0.019)。
　　LN患者的基因型分布狀況為:A和G等位基因頻率為77.1%和22.9%;AA、AG、GG的基因型頻率分別為58.4%、37.3%和4.2%。非LN患者組中:A和G等位

12、基因頻率為82.2%和17.8%;AA、AG、GG的基因型頻率分別為67.5%、29.5%和3.1%。兩組等位基因的頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Gvs.A:OR=1.37,95%CI1.00-1.87,P=0.046),基因型頻率分布差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(AG+GGvs.AA:OR=1.47,95%CI1.02-2.13,P=0.039)。
　　(3)RIP2基因rs16900617和rs16900627位點(diǎn)的單倍型分析將RIP2基

13、因的2個(gè)SNP位點(diǎn)rs16900617和rs16900627構(gòu)建單倍型,單倍型AG和GA在SLE患者組和正常對(duì)照組中的分布差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR=1.37,95%CI1.11-1.70, P=0.003;OR=0.60,95%CI0.45-0.79,P=0.0003)。
　　(4)RIP2基因SNP位點(diǎn)與SLE臨床特征的關(guān)系RIP2基因的2個(gè)SNP位點(diǎn)rs16900617、rs16900627的等位基因、基因型與SLE患者主要臨

14、床特征,如關(guān)節(jié)炎、顴部紅斑、口腔潰瘍等之間不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)(P均>0.05)。
　　結(jié)論:
　　RIP2基因的rs16900617和rs16900627位點(diǎn)及其單倍型在SLE患者和正常對(duì)照者中的分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示RIP2基因多態(tài)性可能與中國(guó)漢族人群SLE遺傳易感性有關(guān)。
　　研究二RIP2血清水平與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究
　　目的:
　　比較SLE患者和正常對(duì)照者,狼瘡腎炎患者和非狼瘡腎炎患者,

15、疾病活動(dòng)期患者和非疾病活動(dòng)期患者之間血清RIP2表達(dá)水平差異,分析血清RIP2水平與SLE患者實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)、臨床特征之間的關(guān)聯(lián)性,探討其在SLE發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法:
　　病例來(lái)自安徽省立醫(yī)院和安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科的門診及住院患者,共80例,SLE的診斷依據(jù)1997年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)修訂的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照來(lái)自健康志愿者,共76例,與病例按照年齡、性別匹配。問(wèn)卷調(diào)查收集研究對(duì)象的一般情況和臨床資料,并

16、進(jìn)行 SLE疾病活動(dòng)指數(shù)(systemic lupus erythematosus disease activity index,SLEDAI)評(píng)分。獲得研究對(duì)象知情同意后,抽取外周靜脈血。采用ELISA試劑盒檢測(cè)血清RIP2水平,比較SLE患者和正常對(duì)照者,狼瘡腎炎患者和非狼瘡腎炎患者,疾病活動(dòng)期患者和非疾病活動(dòng)期患者之間血清RIP2表達(dá)水平差異。采用SPSS10.01軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果:

17、　　(1)不同組別間血清RIP2水平的比較 SLE患者組與正常對(duì)照組的血清RIP2濃度分別為:2.725(1.901,3.876)ng/mL、2.627(1.906,3.309)ng/mL,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-1.009,P=0.313);SLE合并腎炎組與未合并腎炎組的血清RIP2濃度分別為:2.684(1.906,3.529)ng/mL、2.970(1.897,4.258)ng/mL,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-1.353,P=0.

18、176);活動(dòng)期與非活動(dòng)期SLE患者血清RIP2濃度分別為:2.813(2.038,3.876)ng/mL、2.022(1.491,3.825)ng/mL,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-1.550,P=0.121)。
　　(2)血清RIP2水平與SLE疾病活動(dòng)指數(shù)的關(guān)系 SLE患者血清RIP2濃度與SLE疾病活動(dòng)指數(shù)無(wú)相關(guān)性(r=0.094,P=0.409)。
　　(3)血清RIP2水平與臨床特征和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)的關(guān)聯(lián) SLE患者

19、血清RIP2水平與患者的視神經(jīng)受損存在顯著關(guān)聯(lián),視神經(jīng)受損的患者血清RIP2水平降低(Z=-2.096,P=0.023);SLE患者血清RIP2水平與抗RNP抗體、血沉、C反應(yīng)蛋白存在顯著關(guān)聯(lián),在抗RNP抗體陽(yáng)性、血沉升高、C反應(yīng)蛋白升高的SLE患者中血清RIP2水平顯著升高(Z=-2.469,P=0.014;Z=-2.218,P=0.027;Z=-1.967,P=0.049)。
　　結(jié)論:
　　本研究未發(fā)現(xiàn)SLE患者組與正